口蹄疫病毒af2株结构蛋白vp1和h-2d限制性t细胞表位筛选与鉴定.pdf

摘要 表位肽疫苗作为一种新型疫苗，已成为口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)疫苗研究的 Disease 热点之一。由于细胞免疫在口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Virus，FMDV)的免疫应答中发 挥着重要作用，而结构蛋白VPl内又包含着FMDV的主要抗原位点。因此，筛选和鉴定VPl 蛋白有效的H．2Ld限制性T细胞抗原表位，不仅可为进一步研究针对FMDV自然宿主的T细 胞抗原表位提供方法和依据，也可为迸一步研制FMDV表位肽疫苗奠定基础。 本研究通过扩增并测序，获得了完整的FMDVAFt2株VPl序列。采用密码子优化表达方 法，在大肠杆菌中高效表达了该VPl蛋白。经过SDS．PAGE电泳及Western Blotting检测，其分 子量与预期大小相符合，并且保持了良好的免疫原性。与此同时，利用相关生物信息学软件 巴细胞，与30个候选表位肽段分别进行体外共培养刺激，经淋巴细胞增殖实验和T干扰素 FMDVAF／72株结构蛋白VPl中的H．2d限制性T细胞表位，为FMDVT细胞表位的研究提供方法 和依据，为进一步研制FMDV表位肽疫苗奠定了基础。此外，通过鉴定小鼠这一FMDV研究中 常用动物模型的CTLT细胞表位，也有利于了解细胞毒性淋巴细胞在抗FMDV方面的作用。 关键词：FMDV；结构蛋白VPl；T细胞表位；H2．d限制性；表位预测 Abstract anewlcindof becomeoneofresearchhot ofFMDvaccine． vaccine，as vaccine，has spots Epitope andidentificationofTcell ofFMDVis to Screening epitope significantdevelopinghigh-efficiency vaccinesandfurtherresearchduetocellular an roleinimmune of immunityimportant play response FMDVinfectionandstructuralVPlincludemain sitesofFMDV． protein antigen Inthis ofVPlofFMDVAF|72strainswasobtain study,TheCompletesequence throughcloning VPl have inE．coli themethodofcodon and then high-levelexpressed usmg sequencing．andprotein Western that molecularof detectionofSDSand the optimization．The Blottingsuggest weight VPl to and a