口蹄疫病毒非结蛋白3a和3b单克隆抗体的制备及其初步应用.pdfVIP

摘要 摘 要 口蹄疫(Foot-and．momhdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot．and．mouthdiseasevirus， FMDV)引起的以感染牛、猪、羊等偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病，严重危 害畜牧业生产、国民经济和人民生活，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须申报的多种 动物共患传染病之一。FMDV非结构蛋白3A蛋自在病毒复制中起重要作用，可作为宿主细 胞受小RNA病毒感染的标志，而且3A蛋白与病毒的致病力和宿主范围有关；3B蛋白在 FMDV RNA复制合成时起引物的作用。感染动物体内产生高水平的抗3AB蛋白抗体，而在 疫苗免疫的动物体内基本不产生，因此，通过免疫3AB蛋白制备抗FMDV 3AB的单克隆抗 体，既为FMD鉴别诊断提供物质基础，又为深入研究3AB蛋白及其相关联的蛋白的功能奠 定了基础。 溶性表达，并利用Ni．NTA亲和层析纯化3AB，Westernblot证实3AB可与FMDVAsial型 的牛阳性血清发生特异性反应，证实表达的融合蛋白具有较好的抗原性。然后以纯化的3AB 蛋白免疫Balb／e小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，用间接ELISA方法筛 选杂交瘤细胞，有限稀释法进行亚克隆，获得3株能稳定分泌抗3B蛋白和6株能稳定分泌 抗3A蛋白单抗的杂交瘤细胞，分别命名为182、IG8、1El 和10D1，并对这9株单抗进行了生物学鉴定。亚类鉴定结果显示，182和IE1 1为IgM，IG8 为192a，其余均为IgGl亚类，轻链均为1c型。间接免疫荧光试验结果表明，这9株单抗均 blot 能够识别FMDV3AB蛋白。用制备的单克隆抗体对分段表达的3AB蛋白进行Western 49aa,-63aa和25m一39m内。利用单抗4A3和182株，分析了Asia1型FMDV感染BHK．21 过程中3A、3B蛋白随时间动态变化的情况。 3A和FMDV 本研究制备了抗FMDV 3B单抗，并对其相应抗原表位区域进行研究，为 建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法提供了物质基础，也为进一步探索3AB蛋白的结构和 功能奠定了基础。 关键词口蹄疫病毒：非结构蛋白3AB．单克隆抗体：抗原表位区 Abstract and ofMonoclonal PreparationApplication Antibodies NonstructuralProtein3A against and3BofFoot．．and．．MouthDisease Virus Abstract Foot-and—mouth Foot-and·-mouthdisease a disease(FMD)causedby virus(FMDV)is highiy and infecteddiseaseof and wildruminant contagiousacutely cattle，pigs，sheep，goats species．It hasall onaffected it economicallydevastatingimpa