小球藻多糖的制及芦苇生物活性成分的研究.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Preparation of Polysaccharides from Chlorella vulgaris and Studies on Bioactive Components from the Phragmites australis Supervisor: Chengyu Tan Master Candidate: Xiaoxia Zhao Environmental Science Dalian Ocean University Dalian, Liaoning Province, PR.China JUNE 2014 摘要 摘要 本文以海洋小球藻（Chlorella spp）和芦苇（Phragmites australis ）地 上部分为材料，主要进行了两部分的研究：（一）小球藻多糖制备工艺的优化； （二）芦苇地上部分总黄酮制备工艺、化学成分及生物活性。 对小球藻多糖提取进行了工艺优化，通过比较连续回流提取、超声波辅助 提取、闪氏辅助萃取、酶解辅助闪式提取法，发现酶解辅助闪式提取的提取效 率最高；并从六种酶中筛选出胰蛋白酶进行酶解，考察了酶解温度、酶用量、 酶解时间和酶解 pH，确定小球藻多糖酶解提取的较优工艺条件为：酶解温度为 40℃、酶用量为 1.5%、酶解时间为2h 、pH 为 7.5 。将小球藻多糖提取液进行除 蛋白，乙醇分级沉淀后，进行 Sepharose DEAE-52 进行分离纯化，得到小球藻 多糖，最终收率为 3.75 ‰ 。对小球藻多糖进行了抑制肿瘤细胞培养液诱导的脐 静脉内皮细胞的迁移活性测定，其浓度为 50、100g/mL 时对肿瘤细胞培养液 诱导的内皮细胞迁移具有较为明显的抑制作用。 利用多种色谱技术对芦苇石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物 进行了系统分离纯化，共分离得到 13 种化合物，通过理化常数测定，光谱数据 分析，鉴定了其中 7 种化合物，分别为 β- 谷甾醇（β-sitosterol，L-1），对羟基 苯甲醛（4-Hydroxybenzaldehyde ，L-2 ），麦黄酮（Tricin ；5, 7, 4-trihydroxy-3, 5-dimethoxy flavone，L-3 ），麦黄酮7-O-β-吡喃葡萄糖苷（Tricin 7-O-β-glucopyranoside ，L-4 ），单棕榈酸甘油酯（Glycerol alpha-monopalmitate， L-5 ），正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷（n-butyl-O-β-D-fructopuranoside，L-6 ），胡萝 卜苷（daucosterol，L-7 ）。其中L-3，L-4 ，L-5，L-6 为首次从芦苇中分离得到。 测定了芦苇的醇提物、不同溶剂萃取物部分对血管紧张素 I 转换酶的抑制 活性，各部分对 ACE 的抑制活性均随着代测样品浓度增大而增大，其中，正丁 醇层萃取物的抑制活性整体较好，在浓度为 100mg/mL 时，抑制率可以达到 71.6 % 。石油醚层萃取物亦有一定的抑制活性。 考察了闪式辅助萃取-热回流法提取制备芦苇总黄酮的工艺条件，热回流提 取过程采用溶剂为 95%乙醇，在此条件下的最佳工艺为料液比 0.7:100，闪式提 取 5 分钟，热回流 2 小时。结合 5 种大孔吸附树脂进一步富集总黄酮类物质， 发现 AB-8、HPD100 型大孔吸附树脂的吸附率和解吸率都比较高，可进一步纯 化总黄酮。考察了 HPD100 大孔吸附树脂对总黄酮的静态吸附，确定了上样浓 度为 0.053mg/mL、pH 为 6 时，吸附率分别可达 21. 1%、32.6% 。 论文为充分利用海洋小球藻和芦苇资源提供了一定的理论依据。 关键词：小球藻多糖；工艺优化；抑制肿瘤血管生成；芦苇化学成分；芦苇总 黄酮 I