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小鼠胚胎sry因的rna干涉研究
摘 要
为了研究Sty基因的调控网络,采用siRNA技术使Sty基因沉默,探讨了有
效沉默Sty基因的途径和最佳条件。
我们设计、合成针对小鼠Sry基因的发夹状寡核苷酸链,退火后连入真核表达载
4.卜cMvneo
体pSilencer
体pSilencer
4.1/Sty217及pSilencer4.1/Sry565,通过尾静脉注射法将载体质粒
导入妊娠小鼠体内,于小鼠妊娠第11.5天,即11.5
dpc(dayspostcoitum,性交
后天数)取出胚胎,采用双重PCR法对胚胎进行性别鉴定,鉴定为雄性的胚胎采用
半定量RT-PCR法检测Sty基因的表达量,研究不同干扰序列、不同注射时间及注
射剂量对Sty基因表达量的影响。
研究结果,确定了质粒的最佳注射时间为9.5dpc,注射剂量为20瞻,注射干
扰质粒pSilencer
可以显著抑制雄性胚胎Sty基因的表达。
关键词:siRNA;Sty;小鼠胚胎:基因沉默
ontheRNAInterferenceof
Study Sry
in
Mouse
Embryos
Abstract
Inorderto the mechanisminsex madeuse
studyregulation ofsry determination,We
ofthesiRNA tosilencethe inmouse siRNA
sry embryos.Two
technique expression
vectorswere and 4.1/Sry565.The
expression synthesized,pSilencer4.1lSry217pSilencer
siRNA vectorswere into mouse tailvein.Thesexwas
expression injectedgestatedthrough
identified the level wasdetermined
byPCR,and RT-PCR
expressionof跚gene using
inthemalemouse at11.5 time-and
embryos coitum).Thedose
technique dpc(dayspost
effectswasstudied.TheresultSconfirmedthatoneofthesiRNA
-dependent expression
inhibitthe
plasmids,pSilencer4.t/Sry565,couldSrygeneexpressionsignificantly.
wa
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