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小鼠胚胎sry因的rna干涉研究

摘 要 为了研究Sty基因的调控网络,采用siRNA技术使Sty基因沉默,探讨了有 效沉默Sty基因的途径和最佳条件。 我们设计、合成针对小鼠Sry基因的发夹状寡核苷酸链,退火后连入真核表达载 4.卜cMvneo 体pSilencer 体pSilencer 4.1/Sty217及pSilencer4.1/Sry565,通过尾静脉注射法将载体质粒 导入妊娠小鼠体内,于小鼠妊娠第11.5天,即11.5 dpc(dayspostcoitum,性交 后天数)取出胚胎,采用双重PCR法对胚胎进行性别鉴定,鉴定为雄性的胚胎采用 半定量RT-PCR法检测Sty基因的表达量,研究不同干扰序列、不同注射时间及注 射剂量对Sty基因表达量的影响。 研究结果,确定了质粒的最佳注射时间为9.5dpc,注射剂量为20瞻,注射干 扰质粒pSilencer 可以显著抑制雄性胚胎Sty基因的表达。 关键词:siRNA;Sty;小鼠胚胎:基因沉默 ontheRNAInterferenceof Study Sry in Mouse Embryos Abstract Inorderto the mechanisminsex madeuse studyregulation ofsry determination,We ofthesiRNA tosilencethe inmouse siRNA sry embryos.Two technique expression vectorswere and 4.1/Sry565.The expression synthesized,pSilencer4.1lSry217pSilencer siRNA vectorswere into mouse tailvein.Thesexwas expression injectedgestatedthrough identified the level wasdetermined byPCR,and RT-PCR expressionof跚gene using inthemalemouse at11.5 time-and embryos coitum).Thedose technique dpc(dayspost effectswasstudied.TheresultSconfirmedthatoneofthesiRNA -dependent expression inhibitthe plasmids,pSilencer4.t/Sry565,couldSrygeneexpressionsignificantly. wa

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