嵌合动脉炎病毒建及其病毒学特性.pdfVIP

摘要 arteritisvirus， 1996年成立的动脉炎病毒科(Arteriviridae)其成员包括：马动脉炎病毒(equine and syndromevirus，PRRSV) EAV)，猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(porcinereproductiverespiratory 乳酸脱氢酶升高病毒(1actate dehydrogenase—elevating virus，SHFV)。动脉炎病毒感染动物后能引起从无临床症状的持续性感染剑致 hemorrhagicfever 死的急性感染不等的病征。其中PRRSV感染猪引起所谓的“猪蓝耳病”给世界养猪业带来巨大 经济损失。目前涉及到动脉炎病毒复制过程的分子机制，尤其是囊膜蛋白结构与功能的关系还不 清楚。在本实验室已经拥有的PRRSV和EAV全长感染性克隆的基础上，本研究利用反向遗传操 作方法对动脉炎病毒的囊膜蛋白功能、基因转录调控等进行了解析，促进了对动脉炎病毒的进一 步了解，为防治PRRSV及其它动脉炎病毒奠定了一定的理论基础。 1．不同基因型PRRSV嵌合体的构建及其病毒学特性 PRRSV分为两个基因型，基因l型与基因2型，两型之间基因相似性仅为60％左右。对本 为骨架，先将Asc 疫荧光(IFA)和全长序列测定结果证实了子病毒的嵌合基因组结构。将拯救病毒在体外连续传 代至第8代后测序表明嵌合病毒有很好的基因稳定性。用能特异性识别1型PRRSV囊膜蛋白的 本病毒vAPRRS相似的空斑形态；所有嵌合病毒在MARC．145上的复制能力与亲本病毒相似。 异性引物对，从病毒感染细胞的总RNA中扩增出各个亚基因组mRNA(subgenomicmRNA，sg regulation (1eader transcriptionregulmionsequence，TRS-L)互相作用形成相应的杂合sgmRNA；由于l型 RNA)。本研究首次获得了不同基冈型PRRSV嵌 了一些比经典sgmRNA小的亚基因组RNA(sg 两型PRRSV之间可能发生重组。这为进一步研究PRRSV囊膜蛋白结构和功能的关系、开发基因 标记疫苗奠定了理论基础。 2．不同种动脉炎病毒嵌合体的构建及其病毒学特性 目前对动脉炎病毒细胞受体和病毒结合蛋白的认识还没有统一，大部分人认为病毒结合蛋白 是多量囊膜糖蛋白GP5，而有人提出可能是少量囊膜蛋白。这些结论都是基于体外的生物化学实 定性。用特异性识别EAV mRNA序列进行分析发现：虽然EAV和PRRSV 10倍。对vAPRRS．EAV234的sgmRNA转录谱和sg mRNA2-4的转录量明显下降；产生了一系列具有 与PRRSV的TRS．L之间的不精确配对导致sg RNA的意义还未知。本研究不但在世界上首次成功获得了不 潜在编码价值的新sgRNA，这些sg 同种动脉炎病毒之间完整ORF替换的具有感染性的嵌合病毒，更重要的是首次从遗传学和病毒 学的角度阐明少量囊膜蛋白在动脉炎病毒侵入细胞过程中发挥决定性作用。该研究同时提供了一 种生产高滴度PRRSV的方法，极有利于疫苗生产。 3．插入嵌合体动脉炎病毒的构建及其病毒学特性 IFA和核酸序列测定结果均证实了子病毒的基因组结构特点且插入基因能有效表达。研究发现 vAPRRS(EAV234)在EAV PRRSV乃至其它动脉炎病毒可以容纳2套少量囊膜蛋白基因，但是稳定性不强；作为一种潜在 动脉炎病毒结合蛋白，研究囊膜蛋白之间相互作用、病毒包装，开发PRRSV载体等提供了基础。 关键词：动脉炎病毒。嵌合，少量囊膜蛋白，病毒结合蛋白。 H Abstract The whichwasestablishedin1 996hasfour arteritis