幽门螺杆菌卵黄体的研制及其功能的初步评价.pdfVIP

。 谢献胜：幽门螺杆菌卵黄抗体的研制及其功能的初步评价 ／一 幽门螺杆菌卯黄抗体的研制及其功能的初步评价 研究生：谢献胜 导师：彭大新教授 李建基教授 捅 要 最常见的病原，也是引起胃癌发生的关键因素。抗生素的多联治疗对消除Hp的感 染有较好的疗效，然而抗生素治疗在体内仍不能完全有效，而且极易产生抗药性。 因此，探讨其它的治疗途径是一种必然的研究趋势。本研究以Hp为材料，采用不 同培养基进行培养和保存，并制备成完全抗原对刚开产或开产不久的母鸡进行免 疫，用凝集试验法测定其抗体效价，并对免疫接种Hp母鸡免疫应答规律和卵黄抗 体的抑菌活性及理化特性等做了初步探讨，这为制备高含量的抗Hp免疫卵黄及相 关的生物制剂提供技术依据，也为鸡蛋及免疫蛋的开发利用和深入研究提供借鉴。 1 幽门螺杆菌的培养与保存 本试验采用不同培养基对Hp进行培养和保存，结果表明：固体培养Hp，培养 出Hp；严格无菌的条件下，不添加混合抗生素，对细菌的生长没有影响，且不会 造成杂菌污染。液体培养Hp，布氏肉汤基础中加入混合抗生素和6％马血清，Hp 增菌迅速，但如不及时更换新鲜的微需氧环境，极易形成球形体。菌株采取冷冻保 存液法保存于．70。C～．80℃低温条件下6个月，可以成功复苏，且复苏率可达100％。 2抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验 龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，采用凝集试验法测定卵黄中的抗体效价。结果 表明：每间隔15d，采取两次加强免疫方法，可有效的引起免疫应答。母鸡在初免 扬州大学博士论文 抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1：8。体外抑菌试验表明， 高免卵黄抗体具有明显的抑制Hp生长的活性。 3 鸡抗幽门螺杆菌卯黄抗体的理化特性 对鸡抗幽门螺杆菌高免卵黄抗体的理化特性进行了研究。结果表明：pH值、 温度对其活性的影响较明显，胃蛋白酶则加强了这一作用。在pH值单独影响下， pH3为其敏感区，如果同时存在胃蛋白酶，则其敏感区为pH_4，在巴氏消毒温度 条件下其具有较好的热稳定性，这对于工业化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。 4 幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠疾病模型的建立 利用蒙古沙土鼠建立Hp 分别再次接种。方法II的接种方法同方法I，但接种后每日口服雷尼替丁5mg／kg 剂盒、细菌培养和胃组织切片的方法观察沙土鼠胃内细菌感染情况和胃病理组织学 变化。结果表明，给沙土鼠胃内灌服酒精以损伤胃黏膜并每日口服雷尼替丁，在人 工接种35d后，胃内见有多量Hp生长，胃组织病变与Hp自然感染的病例相似。 5 卵黄抗体对幽门螺杆菌感染沙土鼠的预防试验 在成功研制出抗Hp卵黄抗体的基础上，利用蒙古沙土鼠作为实验动物，观察 Ⅲ组分别灌服生理盐水、复合抗生素和抗Hp卵黄抗体，1次／d，连续13d。IV组皮 23％。结果表明灌服和注射抗Hp卵黄抗体，可以抑制沙土鼠感染Hp，其抑制效果 与抗生素组无明显差异(pO．05)。 6卵黄抗体对沙土鼠胃内感染幽门螺杆菌的治疗试验 利用蒙古沙土鼠作为实验动物，观察Hp特异卵黄抗体对胃内Hp感染的治疗 谢献胜：幽门螺杆菌卵黄抗体的研制及其功能的初步评价 48h皮下注射抗Hp卵黄抗体两次。在用药前实验鼠胃内均有大量Hp定植，感染率 服和注射抗Hp卵黄抗体，可以抑制沙土鼠胃内Hp感染，其抑制效果与抗生素相 似。 7幽门螺杆菌跏掳基因的克隆及原核表达 为研制幽门螺杆菌基因工程疫苗或为制备卵黄抗体提供免疫原。以原核载体表 克隆至pGEM-T 质粒上，转化五coli 测表明，融合表达的UreB蛋白分子质量约为80kDa。30℃诱导可使融合蛋白呈可溶 可以被Hp免疫小鼠血清的相应抗体识别，具有良好的免疫学活性。 关键词：幽门螺杆菌；卵黄抗体；体外抑菌；理化特性；疾病模型；UreB 扬州大学博士论文