禽呼肠孤病毒l基因的克隆与序列分析.pdfVIP

摘 要 本试验提取禽呼肠孤病毒天津地区分离株（ARV T-98 ）和内蒙古地区分离株 （ARV C-98 ）病毒的总RNA 。参考GenBank 中禽呼肠孤病毒176 株 （ARV 176 ） 的L2 基因序列设计了5 对特异性引物。应用一步法RT-PCR 技术扩增禽呼肠孤病毒 的L2 基因。将回收纯化得到的目的DNA 与pEASY-T1 载体链接，转化到感受态细 胞，用蓝白斑法筛选阳性重组质粒，再用 PCR 法鉴定阳性重组质粒，然后将 PCR 鉴定为阳性的重组质粒送英潍捷基（上海）贸易有限公司（invitrogen ）进行序列测 定。应用DNAstar 软件将测定序列进行拼接并与参考序列进行比较分析。结果显示 L2 基因节段长3830bp，均含有完整的开放性阅读框(Open Reading Frame ，ORF) ， 编码区位于 15～3794bp 。测定的禽呼肠孤病毒C-98 、T-98 株的L2 基因序列已经登 录GenBank ，登录号分别是JN641888 、JN641889 。 ARV C-98 和ARV T-98 的L2 基因核苷酸及其推导的氨基酸的同源性均很高， 分别为99.7% ，99.4% ；与ARV 176 、ARV S1133 、ARV 138 、和ARV AVS-B 的L2 基因核苷酸同源性在 83.9%～99.7%之间，推导的氨基酸同源性在 96.4%～99.6%之 间；与MRV BYD1 、MRV SC-A 、MRV T3D 和MRV T4N 的L1 基因核苷酸同源性 在 53.4%～54.4%之间，推导的氨基酸同源性在 53.9%～54.4%之间。系统发生树表 明，ARV C-98 、ARV T-98 与ARV 176 、ARV S1133 、ARV 138 、和ARV AVS-B 处 于同一进化分支，其中与 ARV 176 和 ARV S1133 的遗传进化关系最近。与MRV BYD1 、MRV SC-A 、MRV T3D 和MRV T4N 处于不同的进化分支，遗传进化关系 较远。 关键词：禽呼肠孤病毒；L2基因；克隆；序列分析 Cloning and Sequence Analysis of the L2 Gene of Avian Reovirus Abstract The total RNA of Avian reovirus(ARV) isolated in inner Mongolia and Tianjin was extracted.According to the published L2 gene sequence of avian reovirus strain 176 in GenBank,five pairs of primer were designed. The L2 gene of virus were amplificated by RT-PCR and then cloned into pEASY-T1 plasmids and then sequenced. The result showed that each of the acquired sequences L2 gene were 3830bp including a whole open reading frame (ORF 15-3794 bp). The accession numbers of ARV C-98 、T-98 was JN641888 、JN641889, respectively in GenBank. There were high homology in nucleotide sequences and the deduced amino acids sequence of L2 gene between ARV C-98 and ARV T-98, 99