苏云金杆菌晶体素对日本血吸虫作用及作用机理的研究.pdfVIP

∞、云金杆诗晶体1拓索对¨奉衄嫩虫作用及作掰机理的{i；}究 摘 要 血吸虫瘸是一种j一重危害人畜健康的人畜共患地方流行性寄生虫病，目前治疗 血吸虫病主要用奥沙尼喹和吡喹酮等药物，但这些药物会引起不同程度的副作用， 造成药物残留和抗药性，而血吸虫疫苗的保护力较低，所以需要寻找防治血吸虫病 的新药。苏云金芽胞杆菌(简称Bt)具有对人畜安全无毒，不污染环境、无残留、 毒力持久、害虫难以产生抗药性，保持生态平衡等化学药物无法比拟的优点而成为 首选微生物杀虫剂。利用Bt驱杀血吸虫是一个新的领域，为了寻找一种适于杀血吸 虫的生物制剂，本论文研究了Bt对血吸虫的作用及其作用机理。 将血吸虫尾蚴机械断尾获得童虫，经体外培养，用BtYgT一1532，YBT一1522， YBT—1508，YB]。1521伴胞晶体毒素作用于童虫，结果发现四种伴胞晶体毒素均对童 虫有毒杀作用，随着作用时间的延长，毒素浓度的增加，童虫运动缓慢，其在24h、 29．00Pg／ml、19．58№／ml，68．17腿／ml、31．2299／ml。YBT 对童虫的作用效果比YBT—1521高。毒素含量越高，童虫的死亡率越高，毒素作用时 间的延长，其半数致死剂量降低。 用YBT—1532毒索，DEC一293毒素作用于体外培养的日本血吸虫成虫，结果发现 两种毒素均有一定的治疗效果，随着作用时间的延长，毒素浓度的增加，成虫运动 毒杀作用。 感染日本血吸虫30天的小鼠，经静脉注射、肌肉注射、灌胃、腹腔注射YBT-1532 毒素，结果发现四种给药方式对小鼠体内血吸虫均有显著疗效，其减虫率分别为 97 28％、34．74％、25．07％、19．03％，静脉注射的效果极显著高于其它三种方式， 肌肉注射的效果次之，灌胃和腹腔注射效果无差异。 现，毒素对三个不同时期的血吸虫均有明显的治疗效果，其减虫率分别为73．1I％、 85．80％、97．28％。感染30天给药的效果最好，感染20天后给药的效果次之，感染 10天时的效果最差。 YBT-1532毒素蛋白作用于体外培养的日本血吸虫成虫虫体肿胀，体细胞崩解， 肠上皮细胞脱落，体被模糊。 BtYBT-1 532和HD一1毒素蛋白作用于体外培养的日本血吸虫成虫，耿作用1h、 2h、4h、8h、24h、48h的虫体，制作扫描电镜样品，在扫描电镜下观察发现：HD一1 没有引起血吸虫成虫的体表发生变化，YBT-1532引起的雌、雄成虫皮层的瘸损相似， 但雌虫病变较晚、较轻，随着怍用时间的延长，虫体表皮病变越来越严重。其主要 病变为：皮层褶嵴肿胀，诏崎变粗，融合成条索状，或褶嵴皱缩形成裂涨，感觉器 肿胀、变，眵、破溃，皮层表ihi出现糜烂和剥脱，皮层下组织暴露。制作超薄切片， 透射电镜观察发现：HD．1没有引起仇吸虫体壁超微结构的变化，YBT-1532毒素作 用1h时皮层基质小发生变化，4h时，雄虫体壁，基质中出现许多空泡，雌虫体壁 变化不大； 8h时，雄虫体壁，基质中空泡增大，褶嵴肿胀粘连，基膜、环肌肿胀、 雌虫体壁，褶嵴问的空泡增多，基膜肿胀； 12H时，雄虫体壁，褶嵴粘连，杆状分 泌小体和指环体减少，雌虫体壁，基质肿胀，褶嵴粘连；24tl时，雄虫体壁，基质 中形成巨大的空泡，感觉结构坏死，环肌溶解，雌虫体壁，基质肿胀、体壁细胞胞质 内细胞器溶解坏死：48h时，雄虫体壁，基质空泡化，分泌体减少，环肌，纵肌均 肿胀，雌虫体壁，胞质内细胞器溶解、坏死，褶嵴破溃。随着作用时间的延长，雌 虫肠壁基质脂滴增多，出现坏死区域，实质细胞肿胀坏死。 过氧化物酶标记的羊抗兔抗体进行免疫组化实验，结果发现YBT-1532毒素结合在 血吸虫的表皮和肠上皮上。 利用Bt伴胞晶体毒素驱杀日本血吸虫具有重要的环保意义和经济价值，关于 Bt伴胞晶体毒索作用于日本曲．吸虫的机理，国内外还未见报道，本研究为苏云金杆 菌制剂防治人畜共患的血吸虫痫提供了理论依据，发展和丰富了Bt制剂杀虫机理的 理论。 关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 日本血吸虫童虫成虫免疫组 织化学作用机理 c墩虫作朋发作埘舸【理的{lJ}，￡ 抓2i余t-1’国．强体毒素对川奉ifit ABSTRACT