转pepck-基因猪的生物安全评价.pdfVIP

Anhui Agricultural University Master Degree Thesis Biosafety Assessment of Transgenic Pigs Expressing PEPCK-1 Postgraduate candidate: Gao Hui Academic supervisor: Associate Prof. Han Chunyang Co-supervisor: Prof. Zhang Yunhai College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, 230036 Hefei, Anhui, China June, 2013 摘 要 随着动物转基因技术在育种新材料创制、生物反应器、医药、食品以及生物 学基础研究等方面的应用日益广泛，转基因动物的生物安全问题也越来越为人们 所关注。然而，由于对转基因技术的科学普及等工作开展不足、科学家与媒体以 及大众的沟通存在问题等原因，尤其是相关评价体系、内容、方法的建立等还不 健全，使得人们对这一崭新领域知之相对甚少。在转基因家畜中，水平基因转移 或转基因的无意释放对生物多样性有何影响，以及基因修饰对健康动物的潜在威 胁、产品安全性等都是人们非常关心的问题。 本研究以转磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK ）-1 基因的体细胞克隆母猪 为研究对象，通过检测其粪便、接触的土壤以及血液中 DNA 是否发生了水平基 因转移评估其环境安全性；通过检测血液生理生化指标来评估自身健康状况，以 及转基因猪母乳（PEPCK-1 母乳）饲喂普通仔猪健康状况，来评估转基因动物 的产品对其他动物的影响。 为了评估转基因猪的环境安全性，采取了三种方法：1）利用PCR 技术检测 水平基因转移，即考察是否有外源基因转移到了普通猪血液、肠道菌或土壤微生 物中。结果显示，血液、肠道菌和土壤微生物的基因组中均未检测到外源基因。 2 ）利用 PCR 检测转基因阳性猪进行本交过的公猪和饲喂转基因猪母乳的仔猪是 否发生水平基因转移。结果表明，进行本交的公猪和饲喂转基因猪母乳的仔猪同 样没有发生水平基因转移。3 ）利用生理生化的方法测定粪便和土壤中的营养元 素，进而评价转基因阳性猪代谢变化和土壤营养结构的变化。结果发现，土壤和 粪便中营养元素的变化很可能是由土壤空间距离上差异和猪个体之间差异的引 起的，而与外源基因无相关性。以上结果表明所研究的转基因阳性猪对环境安全 可能无影响。 为了考察转基因阳性猪的健康状况，开展了生长性能测定、血常规、血清生 理生化分析、免疫指标测定、生殖激素水平监测。结果如下：1）在测定的生长 性能指标中，转基因阳性猪在 2 、3 月龄时体重、日增重明显高于普通猪，与对 照组比较差异显著。虽然 4 、5 月龄差异不显著，但其平均体重、日增重仍然优 于对照组。2 ）在测定的 7 项血常规指标中，实验组和对照组比较，在 6 月龄时 白细胞（WBC ）测定值差异显著。其他未见显著差异。3 ）在测定的 14 项血清 生理生化指标中，6 月龄甘油三酯（TG ）含量实验组与对照组差异显著，在3、 7 月龄总蛋白（TP ）含量实验组显著低于对照组，并且在整个试验阶段TG 含量 均偏低。其他生化指标转基因阳性猪与对照组之间没有显著性差异。4 ）免疫指 标中，IgG 含量在 6 月龄实验组显著高于对照组。5 ）生殖激素水平检测结果表 明，A1 转基因母猪基本符合母畜在发情期内生殖激素变化的规律，A2 转基因母 I 猪可能受外界因素的影响出现了生殖机能紊乱，但其生殖激素水平处于正常 范围。由以上结果可初步推测，除去繁殖性能方面，外源基因（PEPCK-1 ）对转 基因猪的身体健康未见明显的影响。