银杏抗逆基因的克隆与人胸腺肽植物生物反应器的研究.pdfVIP

上毒交遗大学博士后出站摄告 镀杏抗逆基甚的竟蠹和人聃熙黢檀钫生赞反应墨鹤研究 胸腺肽可以增强免疰系统的功能，在临床治疗中有广泛的运用。临床所用胸 腺肽目前主要是从动物胸腺组织提取或者人工合成，产量有限价格高昂，用转基 因植物生产胸腺肽是一个解决的办法。胸腺肽基因已经在多种转基因植物中表 达，但是仍然有需要改进的地方。本研究根据植物偏爱密码子人工合成Y84bp 的胸腺肽ctl(thymosinalphal，Tal)全基因序列，然后把4个基因串连起来，使用 p35S强启动子构建表达盒。采用强启动子和植物偏爱密码子以及增加拷贝数，有 利于目的基因的高效表达。并在载体上设计了两个左右T-DNA边界，筛选基因 nptIl和胸腺肽基因分别位于不同的T-DNAIR-，以便实现筛选基因和目的基因的分 离。经过酶切、PCR扩增和测序证明，胸腺肽基因正确的构建到了双边界组成型 腺肽基因和nptll基因，在所有的再生植株中都能检测到例I基因，但是只有35 ％左右的植株检测到胸腺肽基因，这个结果初步表明，双边界载体上的两个 T-DNA区在进行遗传转化的时候，可以实现目的基因和标记基因的分别整合。所 以本研究构建的双边界载体是实现Make．free转基因植物的有效方法，可以容易 筛选分离出不含抗性基因的后代植株，有利于产品的推广应用和生态