转基因水稻桔杆crylac蛋白降解的研究.pdfVIP

摘要 转历基因作物是全球商品化程度最快的转基因作物之一，大面积种植转历基因作物后，会 产生大量的含有Bt杀虫蛋白的植物秸秆，这些秸秆如果“秸秆还田”则使秸秆中含有的Bt杀虫蛋 白进入土壤生态系统，造成Bt杀虫蛋白在土壤中的累积，从而可能影响十壤生态系统的平衡。 本实验试图通过生物肥料发酵技术、高温碱法以及沼气发酵技术将转厨基因水稻秸秆中CryIAc 蛋白降解。 从全国不同十壤中筛选出9株能够降解CD，lAc蛋白的菌株，对降解效果最好的菌株进行了 鉴定，并应用在后续的试验中。利用该菌株进行生物肥料发酵及沼气发酵降解转研基冈水稻秸 秆中CD，IAc蛋白。通过单冈素试验确定了利用生物肥料发酵技术降解转历基因水稻秸秆中 程中影响CD，IAc蛋白降解的各个工艺参数进行优化，从而使降解率得到了大幅度的提高。在利 蛋白己基本完全降解。通过单因素实验确定了高温碱法影响转Bt基因水稻秸秆中CryIAc蛋白降 的各个工艺参数进行优化，以较低成本使降解率达到100％。 具体研究结果如下： 130kD对应的历蛋白条带均消失，经多次重复试验，发现菌株FJSB3可稳定的降解Bt蛋白。对 该菌进行菌落形态观察、电镜观察、生理生化试验以及16SrDNA序列克隆测定，初步判定FJSB3 为寡养单胞菌属细菌(Stenotrophomonassp．)。 106 始菌液浓度pH温度，并确定最优参数组合：C／N为30／1、菌液浓度为2．OxCFU／ml、pH 解率为96．25％。 3、将转基因水稻秸秆与蒸馏水以l：4(质量比)比例混合，45℃湿润l天。向预处理的转基 解率达到95．8％。说明在沼气发酵初期阶段未进入发酵罐之前，转基因水稻秸秆中CrylAc蛋白 已基本完全降解。 4、通过单因素实验确定了影响高温碱法对水稻秸秆中CrylAc蛋白降解的主要因素为：温度、 因素主次关系依次为：pn值温度热处理时间，并确定最优参数组合：pH为14、温度为140℃、 加热时间为1．5h，在此条件下转基因水稻秸秆中C巧lAc蛋白的降解率达到100％。 关键词：转研基因水稻秸秆；CDrlAc蛋白降解菌；生物肥料发酵；沼气发酵；高温碱法 Abstract istheworld’S commercializationof Bt·transgeniccrops fastest—growing genetically of straw Btinsecticidal be will after scale crops．Largeplant containing proteins produced large cultivationofBt-modified these residuesinsoil crops．Ⅵ／henleavingtransgeniccrop ecosystem，Bt insecticidalaccumulatesand affectthebalanceofthesoil protein maybe ecosystem．This studyattempts toutilizebio-fertilizer alkalimethodandmethanefermentation fermentation，hightemperature to Ac in deestraw． technology degradateCryIproteinBt—transgenic Nine