粘虫(mythmna separata)中肠丝氨酸蛋白酶cdna的克隆及功能鉴定.pdfVIP

下载本文档

6
0
约14.62万字
约 66页
2016-02-23 发布于贵州
举报
版权申诉

粘虫(mythmna separata)中肠丝氨酸蛋白酶cdna的克隆及功能鉴定.pdf

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

粘虫(mythmna separata)中肠丝氨酸蛋白酶cdna的克隆及功能鉴定

曼皇量曼曼曼量曼曼蔓皇鲁曼曼皇舅舅皇鲁皇篁旨昌罾皇喜曼量_皇量、，^一07口一一目录中文摘要……………………………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………………………．III 1前言………………………………………………………………………………………………1 1．1粘虫…………………………………………………………………………………………l 1．1．1粘虫的生物习性………………………………………，………………………………1 1．1．2粘虫的危害特点………………………………………………………………………．2 L1。3粘虫的防治技术………………………………………………………………………．2 1．2昆虫丝氨酸蛋白酶的分类与结构…………………………………………………………3 1．3昆虫丝氨酸蛋白酶的分子生物学研究……………………………………………………3 1．3．1基因克隆………………………………………………………………………………～3 1．3．2丝氨酸蛋白酶的重组表达……………………………………………………………．．4 1．3．3丝氨酸蛋白酶在昆虫体内的重要作用………………………………………………．．4 1．4RNAj技术与害虫防治……………………………………………………………………．．5 1．5本试验的研究目的与意义…………………………………………………………………．6 2材料与方法……………………………………………………………………………………～8 2．1试验昆虫及饲养方法………………………………………………………………………8 2．2主要试剂及仪器……………………………………………………………………………8 2．3粘虫中肠丝氨酸蛋白酶基因的克隆………………………………………………………9 23．1总则A的提取及第一链cDNA的合成………………………………………………9 23。2丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆………………………………………………………lO 2．3．3丝氨酸蛋白酶cDNA全长序列的获得………………………………………………12 2,3．4序列分析………………………………………………………………………………13 2．4丝氨酸蛋白酶基因的原核表达及活性测定……………………………………………．．13 3 2．4．1原核表达载体的构建…………………………………………………………………1 2．4．2重组蛋白的诱导表达与sDs．PAGE检测……………………………………………14 2．4．3重组蛋白的Westernblot验证………………………………………………………．15 2．4．4重组蛋白的变性、纯化与复性………………………………………………………16 2．4．5丝氨酸蛋白酶重组蛋白的活性测定…………………………………………………16 2．5丝氨酸蛋白酶基因的分子特性及功能研究……………………………………………．】6 2．5．1丝氨酸蛋白酶基因的时空表达模式分析……………………………………………16 2．5．2丝氢酸蛋白酶基因对于饥饿处理的表达模式分析…………………………………16 2．5．3丝氨酸蛋白酶基因对于蜕皮激素的表达模式分析…………………………………17 2．5．4丝氨酸蛋白酶基因对于Bt(CrylAc)原毒素的表达模式分析……………………17 2．5．5荧光定量PCR(RealqimePcR)检测……………………………………………