通过二次抑制差杂交方法克隆和鉴定大豆耐盐相关基因.pdfVIP

摘要 大豆是世界上重要的粮食作物，又是我国主要的油料作物。大豆属于中度耐盐植物，受盐渍 条件影响显著，在盐渍条件下产量下降明显。我国是盐碱化土地分布广泛的国家之一，且由于灌 溉不当、植被破坏和海水入侵等因素，致使土地盐渍化的面积每年还在不断增加。因此，培育耐 盐品种显得尤为迫切。抑制差减杂交技术是一个研究基因差异表达的有效方法，而且在多数植物 中都有成功应用的例子。但是，在筛选文库时会得到大量的EsT序列，获得的有效基因数目较少， 筛选的效率较低。尽管与耐盐机理相关的信息比较丰富，但是耐盐机理的基础理论研究还不够深 入。为了更好的理解大豆盐胁迫反应的分子机理和克隆一些大豆中重要的耐盐基因。 本研究利用大豆耐盐品种文丰7号和盐敏感品种Union，分别构建了耐盐大豆品种根系盐诱导 号为H0759947．H0761446。 经过序列比对分析，挑选了16个可能与耐盐性相关的基因。利用Real—timePCR方法分析它们 在不同大豆品种盐处理前后的差异表达情况。结果表明，这些基因在文丰7与Union盐处理前后中 的表达存在差异。 对文库SSHl和SSH2中相同和相似的EST序列进行了Dotblot杂交检测。杂交的结果表明，文 进行了GO基因的功能注释和COG功能分类分析。结果证明，文库SSH3可以将一些与生长发育和 防御机制相关的基因剔除掉。因此，文库SSH3确实使耐盐相关的基因得到了富集，而且提高了筛 选的效率。 从与大豆耐盐性高度相关的EST序列中确定并选择了2个候选基因。通过与NCBI中的 EST数据库进行比对分析，预测和克隆了两个基因。生物信息学分析发现，它们分别与硫氧还 蛋白和耐钠、锂离子基因同源性很高，分别被命名为GmTrx和GmSLTo而且前人研究发现， 这两类基因与提高植物的耐盐性相关。构建了GmSLT基因根系转化正、反义和缺失的表达载 体，利用大豆根系转化系统研究了这个基因与耐盐性的关系。试验结果表明，GmSLT基因的过 表达在一定程度上提高了大豆转基因发状根和大豆复合体植株的耐盐性。 GmSLT 关键词：大豆，抑制差减杂交，盐胁迫，GmTrx， Abstract isoneoftheworld’S food China’S oil which Soybean importantcrops．alsomajorcrops．Soybean was salt—tolerantWas affectedsaline insaline moderately plants by conditions，yield significantly decreased Wasoneofthe because conditions salinization significantly．China widespreadcountries，and and intrusion intheareaof water andother improperirrigation，vegetationdamage factors，resulting salinizedis is land tolerantvarieties constantly everyyear．Therefore，breedingparticularly increasing