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一、绪论 1、微生物学奠基人：法：巴斯德 德：柯赫 2、巴斯德的工作: 发现并证实发酵是由微生物引起的 彻底否定了“自然发生”学说 免疫学——预防接种 其他贡献：巴斯德消毒法等 3、柯赫的工作 (1)微生物学基本操作技术方面的贡献 细菌纯培养方法的建立 、配制培养基、流动蒸汽灭菌、染色观察和显微摄影 (2)对病原细菌的研究作出了突出的贡献： 具体证实了炭疽病菌是炭疽病的病原菌 发现了肺结核病的病原菌 证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——柯赫原则：1 在每一病例中都出现这种微生物； 2 要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来； 3用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生； 4从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物来。 二、微生物的纯培养 1、无菌技术：在分离、转接、培养微生物时防止其它微生物的污染的技术。 2、菌落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为~。 3、固体培养基分离纯培养的方法：稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线法、 稀释摇管法 4、单细胞分离法：采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。 5、选择培养分离：包括利用选择培养基直接分离和富集培养 6、二元培养物：培养物中只含两种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养。 7、微生物的保藏：传代培养保藏、冷冻保藏、干燥保藏法 8、微生物的染色观察：染色观察的样品需进行固定，目的：一是杀死细菌并使菌体黏附于玻片上，二是增加其对染料的亲和力。常用方法：火焰加热和化学固定。 细菌染色法： 死菌：正染色： 简单染色法和鉴别染色法（革兰氏染色、抗酸性染色、芽孢染色、姬姆萨染色） 负染色：荚膜染色法 活菌：美蓝、TTC等染色。 9、微生物的类群及特点: 　个体小、结构简、胃口大、食谱广、繁殖快、易培养、数量大、分布广、种类多、级界宽、变异易、抗性强、休眠长、起源早、发现晚。 10、面积/体积比：这样大的比表面积特别有利于它们和周围环境进行物质、能量、信息的交换。微生物的其它很多属性都和这一特点密切相关。 三、微生物细胞结构与功能： 细胞结构： 1、细胞壁（cell wall）是位于细胞表面，内侧紧贴细胞膜的一层较为坚韧，略具弹性的细胞结构。 功能： （1）固定细胞外形和提高机械强度； （2）为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需； （3）渗透屏障，阻拦酶蛋白和某些抗生素等大分子物质（分子量大于800）进入细胞，保护细胞免受溶菌酶、消化酶和青霉素等有害物质的损伤； （4）细菌特定的抗原性、致病性以及对抗生素和噬菌体的敏感性的物质基础； 革兰氏染色： 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色 肽聚糖(peptidoglycan)：又称粘肽(mucopeptide)、胞壁质(murein)或粘质复合物，是真细菌细胞壁中的特有成分。结合在革兰氏阳性细菌细胞壁上的一种酸性多糖 磷壁酸：革兰氏阳性细菌细胞壁上特有的化学成分，主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸。主要生理功能： 细胞壁形成负电荷环境，增强细胞膜对二价阳离子的吸收； 贮藏磷元素； 增强某些致病菌对宿主细胞的粘连、避免被白细胞吞噬以及抗补 体的作用； 能调节细胞内自溶素(autolysin)的活力，防止细胞因自溶而死亡。 缺壁细菌:L型细菌 自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株 原生质体（protoplast）：在人为条件下，用溶菌酶处理或在含青霉素的培养基中培养而抑制新生细胞壁合成而形成的仅由一层细胞膜包裹的，圆球形、对渗透压变化敏感的细胞，一般由革兰氏阳性细菌形成。 球状体 指还残留了部分细胞壁 革兰氏染色阴性菌 其共同特点是： 对环境条件变化敏感，低渗透压、振荡、离心甚至通气等都易引起其破裂； 有的原生质体具有鞭毛，但不能运动，也不被相应噬菌体所感染； 在适宜条件（如高渗培养基）可生长繁殖、形成菌落，形成芽孢。及恢复成有细胞壁的正常结构。 比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。 支原体(Mycoplasma)：在长期进化过程中形成的、适应自然生活条件的无细胞壁的原核生物。因它的细胞膜中含有一般原核生物所