小麦游离小孢子伤组织诱导及半原生质体外源dna电击转化的研究.pdfVIP

小麦游离小孢子愈伤组织诱导及半原生质体 外源DNA电击转化的研究 中文摘要 电击基因转移技术是从1985年开始，应用于植物细胞和原生质体的遗传转化的， 随着生物技术的发展，现已广范应用于各种植物中。将电击转化技术用于小麦游离小 孢子半原生质体，目前还无相关报道。由于小麦游离小孢子半原生质体较之小麦胚性 愈伤组织原生质体易于培养，且小麦游离小孢子的培养体系已R趋完善，因此，小麦 游离小孢子半原生质体是良好的电击转化受体。鉴于此，本文主要从以下三个方面进 行了研究：①对11个不同小麦及小黑麦品种的游离小孢子进行培养及活性检测，筛选 出了适合于游离小孢予培养的最佳培养基、碳源、最适培养条件，游离小孢子最佳分 离方法以及最易于进行游离小孢子培养的品种；②通过酶解试验，筛选出了最佳酶解 参数组合，为电击试验做好了准备；③以最佳酶解参数组合处理过的最易于进行培养 的品种的小孢子半原生质体作为受体，通过导入香豆素一5一dUTP,筛选出了进行电击转 化的最佳参数组合。主要试验结果如下： 小麦幼穗在进行4。C低温预处理3天后分离到的小麦小孢子的平均活性最高达到 以麦芽糖为碳源培养的游离小孢子在培养的4天内活性最高，达到4．35％，而以蔗糖 为碳源培养的游离小孢子活性最低。因此，麦芽糖为小麦游离小孢子培养的最佳碳源， 蔗糖不适宜作为小麦游离小孢子培养的碳源。通过对几种游离小孢子分离方法的比较， 筛选，发现磁力搅拌器法最适于进行小麦游离小孢子的分离。通过混合酶液酶解破壁 试验发现能产生最薄细胞壁厚度的酶解参数组合为：1．5％的混合酶液浓度(其中纤维素 酶浓度为14％，果胶酶的浓度为0．1％)，28℃的酶解处理温度和8h的酶解处理时间。 经这一参数组合处理过的小麦游离小孢子的细胞壁厚度最薄，为0．839m，而 中纤维素酶浓度为1．9％，果胶酶的浓度为0．1％)能产生大量原生质体，非常适于原 生质体培养。通过进行游离小孢子愈伤组织诱导试验，发现Cui2B培养基最适于进行 药接种密度，27+1℃的暗培养温度对小麦游离小孢子愈伤组织诱导的有利。通过游离 小孢子培养试验，发现水生型普通小麦的游离小孢子培养易于抗旱型普通小麦和八倍 体小黑麦，而八倍体小黑麦的游离小孢子最难培养。水生型品种7015是所有11个品 种中最容易进行游离小孢子培养的品种，因此，电击转化试验以7015的小孢子半原生 质体为受体。通过电击转化试验，筛选出能进行游离小孢子电击转化的最佳参数组合 率为9．6％，未破碎细胞比率为78．9％，二者乘积为0．07574。 关键词：小麦游离小孢子 半原生质体 愈伤组织诱导 酶解参数组合 电击转 化电击参数组合 StudiesontheInductionofCallifrom and Isolated Microspores the DNATransfer ofthe by Exogenous Electroporation ofWheat Semi-protoplasts Summary usedto Since1985．the ofDNAtransfer hasbeen the technique byelectroporation transformationof cellsand the of