小麦磷转运蛋白因的分子特征、表达及遗传转化.pdfVIP

摘 要 植物根系对磷的吸收和磷在细胞和组织间的传输，是通过位于细胞原生质膜上的 磷转运蛋白介导的需能主动运输过程。本项研究针对迄今有关小麦磷转运蛋白基因研 究和报道较少的现状，利用现代生物信息学技术和分子生物学技术，对部分小麦磷转 运蛋白的分子特征、表达特性进行较全面的研究。主要研究结果如下： 1、通过在国际生物信息学网站进行小麦磷转运蛋白基因查找，获得4 个尚未进 行特征分析、表达和功能研究的小麦磷转运蛋白基因，GenBank 登录号分别为 AF488415 、AJ830009 、 AY293827 和AY293828 。本研究依次命名为TaPT1、TaPT2、 TaPT3 和TaPT4。 2 、TaPT1~TaPT4 的编码氨基酸数量变化在 467~555 之间，分子量变化在 57.44~60.86 之间，含有在 11 至 14 个跨膜域，以及蛋白激酶C 位点和酪蛋白激酶磷 酸化位点。表明TaPT1~TaPT4 具有植物种属磷转运蛋白基因共有的结构特征。各供 试小麦磷转运蛋白基因的表达特征存在较大差异。TaPT1 在正常供磷水平下，根叶中 的均有表达，低磷胁迫条件下，根系中检测不到该基因的转录本，而叶片中表达表现 为随低磷胁迫时间延长不断增加；TaPT2 和 TaPT3 的表达表现为根系特异表达的特 征，随着低磷胁迫时间延长，表达水平也不断增强。TaPT4 在根叶及不同供磷水平下 呈组成型表达特征。 3、采用染色体步移技术克隆TaPT2 的启动子，克隆的启动子全长1237 bp。分 析表明，在TaPT2 启动子的翻译起始位点（ATG ）上游附近，含有转录调控的保守元 件 TATA 盒和 CAAT 盒。此外，含有应答低磷胁迫逆境能力的 PHO-like 元件 （GACGTGG, -18 bp ）。表明该PHO-like 元件可能介导了TaPT2 对低磷胁迫的应答。 4 、利用 DNA 重组技术，构建了融合 TaPT2 启动子的双元表达载体 pCAMBIA3301-TaPT2-Gus，以及用TaPT2 不同缺失片段长度驱动报告基因Gus 表达 的双元表达载体。为进一步揭示TaPT2 的转录调控机制奠定了基础。 5、以通过 GenBank 查找获得的 1 个栽培一粒小麦磷转运蛋白基因（TabPT1, GenBank 登录号：AF488415 ）为基础，对该基因的分子特征、表达特性进行了研究。 研究表明，TabPT1 是普通小麦TaPT1 的祖先，在分子特征和表达特性上与TaPT1 一 致。构建了融合TabPT1 启动子及其不同缺失片段的双元表达载体，为进一步揭示该 基因的转录调控机制和功能奠定了基础。 关键词：小麦（Triticum aestivum L. ）；野生一粒小麦（Triticum boeoticum）；磷转 运蛋白基因；分子特征；表达；表达载体构建 Molecule characteristic, Expression of Phosphate Transporter Genes in Wheat and Gene Genetic Transformation Master candidate: Zhao fang-hua Major: Crop Molecular Biology for High Yield Supervisor: Xiao kai Abstract The uptake by the roots and the transportation in cells and tissues of inorganic phosphorus (Pi) were mediate