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医疗器械微生物限度检验 概述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。 概述 微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物 特点： 1、个体微小，一般0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞 的，非细胞的 3、进化地位低 分类：原核类：二菌，四体（细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体） 　 真核类：真菌，原生动物，显微藻类　　 非细胞类：病毒，亚病毒 概述 医疗用品的分类 按医疗用品与人体接触的性质以及对人体使用安全性要求分三类： a)Ⅰ 类医疗用品：接触人体完整皮肤的医疗用品 b) Ⅱ类医疗用品：接触人体未破损粘膜的医疗用品 c) Ⅲ类医疗用品：进入人体无菌组织、器官和血液 以及接触破损皮肤和粘膜的医疗 用品 常用检测标准 《中华人民共和国药典》 2010年版二部附录XI J “微生物限度检查法” GB 15979-2002 《一次性卫生用品卫生标准》附录B ISO11737-1:2006 Sterilization of medical devices– Microbiological methods—Part1: Determination of a population of microorganisms on products 实验条件 无菌操作技术 实验环境 实验器材 无菌操作技术 微生物学基础 微生物实践基础 无菌操作意识 实验环境 洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域或隔离系统； 定期按GB/T16292-16294：2010《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证； 实验中监控：实验时将制备好的营养琼脂平板打开放于实验台上，至实验结束收起，30 ℃ ~35℃培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。 实验器具 仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。 用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、牛皮纸等。 实验准备 实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法 实验环境保证 环境清洁，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新洁尔灭(1:1000)溶液或其他适宜消毒溶液） 空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪 实验试液 稀释剂 1.0.9%氯化钠溶液 2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 3.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：调解pH至近中性，其中蛋白胨对细菌细胞有保护作用有利于菌落数及控制菌测定。 表面活性剂、中和剂或灭活剂 鉴定用试剂 1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液 培养基 标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基 培养基 培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母菌霉菌（6.0～6.5）。调节可用1N HCl或NaOH。 培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。 制成的培养基应透明，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的变化。 灭菌方式 湿热：115 ℃ ~121 ℃，15min~30min 物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。 干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。 灭菌程序需要经过验证。 计数培养基适用性检查 细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 计数培养基适用性检查 菌种 大肠埃希菌　 　　［CMCC（B）44 102］ 金黄色葡萄球菌　 ［CMCC（B） 26 003］ 枯草芽孢杆菌 　［CMCC（B） 63 501］ 白色念珠菌 　　　 [CMCC(F)　 98 001]　 黑曲霉 　　　　 [CMCC(F) 98 003]　 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采