铝调控饭豆根系檬酸分泌机制及酵母表达人工设计的酸性多肽片段以提高抗铝性的初步研究.pdfVIP

图表目录 圈2一1．铝诱导饭豆柠檬酸分泌的时间响应关系…………………………………………22 图2—2．缺磷对有机酸分泌的影响………．………………………………………．……．．23 图2—3．La和Al对有机酸分泌的影响……………………………………………………24 图2—4．不同根段柠檬酸分泌量和体内含量……………………………………………25 图2—5．不同阴离子通道抑制剂对柠檬酸分泌的影响…………………………………26 图2—6．不同柠檬酸载体抑制剂对柠檬酸分泌的影响…………………………………27 图2—7．铝脉冲处理后，A一9一C和PI对柠檬酸分泌和含量的影响……………………28 图2—8．蛋白台成抑制剂对柠檬酸分泌的影响．…………………………………………．29 表3—1．LpM培养基组成……………………………………………………………………39 表3-2．NolI—EcoRI双酶切反应………………………………………………………．4l 表3—3．No“单酶切反应………………，．………………………………．………………．42 表3-4．AwII单酶切反应…………………………………………………………………．42 表3—5．T。DNA连接酶连接反应…………………………………………………………42 表3．6．分离胶和浓缩胶配制………………………………………………………………44 图3一1． pPIc9质粒中的部分片段………………………………………………………49 图3—2． 质粒pPIC9的结构示意图……………………………………………………。50 图3．3，EcoRl—NotI双酶切结果DNA电泳图…………………．．……………………5l 图3—4．单酶切结果DNA电泳图………………………………………………………………5l X 爰 希 本文是在导师郑绍建教授的悉心指导下完成的。从论文选题，试 验设计，方案实施以及论文的撰写成册都倾汪了导师的智慧和心血。 导师渊博的知识、开阔的思路、严谨的治学态度、勤勉的敬业精神、 豁达平易的待人风格给了我很多启迪，将是我终生学习的楷模。 在历时?弃的学习、试验和写作避程中．我得到了浙江大学环境 与资源学院的各位领导，老师的关心，指导和帮助。在此向他们表示 衷心的感镶／ 感谢本实验室的拐建立、尤江峰，刘强，金崇伟、李雅颖，俞雪 辉、何李生等同学在研究、学习和生活中给予的热忱帮助。感谢同窗 好友张晓玲、孔文杰、鲁红绢、赵晴潇等．有幸与他们结识，是我人 生中的一个巨大收获。 我深深感谢我的父母，这么多年采，他们一直在精神上和物质上 给予我最大的支持，而直到今天我所能做的只是在完成论文之际向他 们表示感激之情。惭愧之心，难以用话言描述，希望我今后能做得更 好，以报答这人间最伟太的感情。 感谢参加本论文评阅和答辩的老师并敬请批评指正。 张蕾 嬲年5月于晰江大学 V 摘 要 铝毒是限制酸性土壤上作物生产的主要因子。一些植物或基因型拥有耐铝机 制以解除或者减轻生长介质中的铝毒。Al胁迫下，植物根系有机酸的分泌被认 为是最为重要的抗铝机制，根据Al胁迫下有机酸分泌时间响应上的不同，可将 铝诱导的根系有机酸分泌划分为两种模式，然而，关于Al是如何调控有机酸分 泌的过程还有待进一步探明。此外，基于植物中富含氨基酸，含两个羧基并带有 强负电荷的氨基酸如天门冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Olu)及富含这些氨基酸的 多肽和蛋白质理论上可以和AI”相结合，降低A13+的毒性。但迄今尚未发现拥有 分泌这类多肽以提高抗铝性的植物或微生物。本研究一方面以模式II(铝胁迫与 有机酸的显著分泌间在时间上有明显的滞后期)植物饭豆为材料，研究铝调控有 机酸分泌的关键因子；另一方面，通过人工合成多肽片段在酵母中表达，初步探 讨其可行性，以明确氨基酸多肽片段在耐铝机制中的可能作用。结果概述如下： 1．调控饭豆根系铝胁迫下柠檬酸分泌的关键因子 铝胁迫下饭豆根系可分泌柠