吉林省主栽水稻种组织培养体系的优化及抗除草剂基因转化研究.pdfVIP

型丝丝堑丝趑塑丝丝苎丝璺壁丝垄丝丝塑型垄些壁 摘 要 本文对吉林省主栽水稻品种进行了组织培养特性的优化研究；应用基因枪法 将抗BASTA除草剂基因(bar)转入吉林省主栽的高产、优质水稻品种中，获得 了转基因水稻植株，研究结果如下： 一、优化了吉林省主栽水稻品种(系)成熟种子胚的组 织培养体系 (1、不同品种(基因型)的愈伤组织诱导频率和分化频率差别很大，吉89—45、 超产二号、丰优50t和车优307四个基因型的愈伤组织、诱导频率分别为86．4％、 88．7％、80．8％和81．6％；吉89-45、超产二号和丰优501分化率分别达到50．1％、 45．8％和49．5％。 2、继代培养基中减少2,4二氯苯氧乙酸(2，4一D)用量到1．0toga．，添加萘 乙酸(NAA)Img／L和激动素(KT)O．5mgrL可以改善水稻愈伤组织的生长状 态。圆型、色泽浅黄、质地紧密，分散性好的胚性愈伤组织数量增多，提高了水 稻愈伤组织的分化能力， 3、分化前干燥处理16小时，可以使水稻愈伤组织的分化率提高20．6．37．2％。 处理时间达到36小时后，愈伤组织的分化能力反而下降。二卜．、，一 7／ j 二、应用Gus基因(B。glucuronidase)的瞬间表达研究， 优化了PDS．1000型基因枪转化吉林省主栽粳稻品种 (Japonica)成熟胚来源愈伤组织的各种参数。 f ＼1、在DNA一金弹与受体靶细胞距离为9厘米，轰击2次时，转化效率最 高，Gus基因的瞬间表达效率达到88．2％1当轰击距离为6厘米时，瞬间表达率 有所提高，但金粉对靶细胞产生破坏作用，转化效率降低：轰击距离为12厘米 时转化效率降低。 2，轰击距离相同时，随着轰击次数的增多，Gus基因的瞬间表达效率提高。 轰击距离为9厘米时，轰击1、2、3次时，Gus瞬间表达效率分别为30．60％、 88‘25％和90‘04％。)·。 三、获得了抗BASTA除草剂的转基因水稻植株 f 以成熟水稻胚来源的胚性愈伤组织为受体，应用基因枪法将质粒pDMS03 (含报告基因Gus和抗除草剂基因bar)转入北方早熟栽培粳稻品种吉89-45中， 获得了转基因水稻植株。经转基因植株叶片的除草剂涂片试验表明，Do．1，Do．2， Do．3三个转基因植株水稻叶片颜色没有变化，仍为绿色，表现对BASTA除草剂 的抗性，证明外源基因在转基因叶片中表达，使水稻叶片产生对BASTA除草剂 抗性。经PCR和Southern杂交检测，证明抗除草剂基因已整合到水稻基因组中。 D0．5转基因植株中检测到429bp的bar基因目标带，但对除草剂敏感，外源基因 在Do-5植株中产生基因沉默现象。、 ．一一 。，r—i 关键词s水稻．基因，遗传转化。抗除草剂 —一—一一一～———一 of toelitericevarieties herbicide of Transformation genes behivier inheritance andtheir Province Jilin Abstract and culture forelite 201 Thetissue system rice(Japonic