成纤维细胞有丝裂同步化条件的摸索及hsf-2基因在绒山羊染色体中的定位分析.pdfVIP

摘 要 目前对于绒山羊 Y 染色体相关基因的研究较少，被定位在绒山羊 Y 染色体上的功 能基因更是未见报道。为了丰富绒山羊的基因图谱，进一步扩大绒山羊的功能基因的 定位，完善绒山羊 Y 染色体上的遗传信息，本实验选取了 HSF-2 基因，并对其进行定 位。HSF-2 基因主要在细胞循环、胚胎发育、细胞分化、生殖细胞的形成中发挥作用， 对热刺激信号有耐受性,同时对调控机体生长、发育、分化的信号更为敏感。因此， 了解HSF-2 的基因相关信息对绒山羊的选育具有重要意义。 实验通过体外培养成纤维细胞，制作细胞的染色体核型，并对核型进行分析，确 定染色体悬液制备的最优条件。然后以 HSF-2 基因的质粒 DNA 标记探针，与绒山羊 的成纤维细胞染色体标本进行杂交，从而对绒山羊的HSF-2 基因进行物理定位。 结果如下： （一）为了制备高质量的染色体标本，获得大量处于中期分裂相的细胞，对培养条件 进行了摸索，结果如下： 1、未经任何同步化处理，正常培养 72h 成纤维细胞，流式检测 G2/M 期所占比例仅为 0.18%。 2、运用秋水仙碱同步化处理的最适浓度是 0.07ug/ml，最适作用时间是 18h，得到的 G2/M 期最高比例为 10.88%。 3、运用nocodazole 同步化处理的最适浓度是 300ng/ml，最适作用时间是 24h， 得 到的 G2/M 期最高比例为 15.10%。 4、比较发现对于绒山羊的成纤维细胞来说，nocodazole 是更加适合的有丝分裂抑制 剂。 （二）对HSF-2 基因的荧光原位杂交定位结果如下： 本研究确定了HSF-2 基因在内蒙古绒山羊的Y 染色体上，其HSF-2 基因属首次在 绒山羊染色体上定位，进一步丰富了绒山羊的物理图谱。 关键词：内蒙古绒山羊；HSF-2；成纤维细胞培养；核型制备；荧光原位杂交 study on synchronization conditions exploration in mitosis for fibroblast cells and chromosome localization of HSF-2 gene in goats Abstract At present, there were few studies on the related genes on Y chromosome for cashmer e goats, especially functional genes. The purpose of this study was to enrich genetic map, f urther expand the functional gene localization and improve genetic information of Y chrom osome in cashmere goats by analyzing HFS-2 gene. The HSF-2 gene was chosen to locate on chromosomes of cashmere goats in this study. And this gene has many functions, such a s cell cycle, embryonic development, cell differentiation and the formation of reproductive cells. The HSF-2 gene had a tolerance on thermal stimulation signals, while it can regulate the growth, development and differentiation of the body. Therefore, finding the relevant inf ormation about HSF-2 gene had a great significance for the breeding work of cashmere goa ts. Firstly, the optimal conditions for preparation of chromosome suspension were determ ined by