血液中硫化氢的测定气相色谱-质谱联用法.docVIP

硫化氢中毒血液中硫化物的测定 气相色谱-质谱联用法 1 范围 本标准规定了硫化氢中毒血液中硫化物的气相色谱-质谱联用法测定方法。 本标准适用于硫化氢中毒血液中硫化物的定性及定量分析。 本标准硫化氢中毒血液中硫化物测定方法的检出限为0.56 ?g/mL。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987， MOD） GA/T 122 毒物分析名词术语 原理 硫化氢中毒血液中的多种形态硫化物在碱性条件下转化成硫离子，经衍生化后采用液-液萃取法提取衍生物，并用气相色谱-质谱联用仪进行检测；经与平行操作的硫化钠对照品比较，以保留时间、特征离子进行定性分析，用内标法、峰面积比进行定量分析。 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 硫化钠 分析纯，含量99%以上。 硫化钠对照品溶液 精密称取对照品硫化钠适量，用去离子水配成20 mmol/L 的硫化钠标准溶液，试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述标准溶液用去离子水液稀释而得。 五氟苄基溴 1,3,5-三溴苯(TBB) 苯扎氯铵 四硼酸钠 磷酸二氢钾 乙酸乙酯 甲苯 仪器 气相色谱-质谱联用仪 配有电子轰击离子源(EI) 分析天平 感量0.1 mg 漩涡振荡器 低温离心机 精密移液器 可控温摇床 测定步骤 样品处理 取血液0.4 mL于具塞离心管中，加入1.5 mL 5 ?mol/mL苯扎氯铵的0.04 mol/L四硼酸钠溶液，然后加入20.0 ?mol/mL五氟苄基溴甲苯溶液1.0 mL、10.0 ?mol/L TBB乙酸乙酯溶液(内标)1.0 mL，加盖密封，于振荡器中涡旋振荡1 min，置于55℃恒温摇床中振摇4 h, 加入0.1 g的磷酸二氢钾，振荡器中涡旋振荡1 min，于转速4 000 r/min离心5 min,分离有机层，取样1.0 ?L进行气相色谱-质谱联用法分析。 测定 6.2.1 气相色谱-质谱联用仪测定参考条件 a) 色谱柱：HP-5MS 30 m×0.25 mm×0.25 ?m； b) 柱温：初始温度50 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升到280 ℃，保持1 min； c) 进样口温度：200 ℃； d) 传输线温度：240 ℃； e) 载气：氦气，纯度≥99.9999%，流速1.0 mL/min； f）分流比：10:1； g) 进样量：1.0 ?L； h) 离子源：电子轰击离子源； i) 检测方式：选择离子检测扫描。 6.2.2 定性测定 在相同的试验条件下进行样品测定时，如果检材的总离子流色谱峰保留时间与空白检材添加硫化钠标准品的色谱峰保留时间相比较，相对误差在±2%内，且检材中添加硫化钠标准品时，其色谱峰峰高与峰面积相应的增加，而空白检材中未出现该色谱峰，则可认为检材中含有该硫化物成分。 6.2.3 定量测定 本方法采用内标法-单点校正法或内标法-标准曲线法定量测定。 6.2.3.1 内标法-单点校正法 在空白血液中添加相近浓度的对照品，和检材按照以上步骤同时进行定量测定。检材浓度应在添加对照品浓度的±50%以内。 6.2.3.2 内标法-校准曲线法 在空白血液中添加适量硫化钠对照品制得一系列校准样品，以硫化钠衍生化物与内标峰面积比对硫化钠浓度绘制标准曲线，用标准曲线法对检材进行定量，并且保证所测样品中硫化物的浓度值在其线性范围内。 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 平行试验中两份检材测定结果按两份检材的平均值计算，双样相对相差不得超过20%。双样相对相差按照式（1）计算： 双样相对相差（%）=×100 …………………………………（1） 式中： C1、C2——两份样品平行定量测定的结果； ——两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。 6.4 空白试验 除以相同基质空白替代检材外，均按上述步骤进行。 结果计算 以内标-校准曲线法或按式(2)计算被测样品中硫化物的浓度： C= …………………………………（2） 式中： C——血液样品中目标物的浓度，单位为微克每毫升(?g/mL)； A——血液样品中目标物的峰面积； A′——标准溶液中目标物的峰面积； Ai′——标准溶液中内标物的峰面积； Ai——血液样品中内标物的峰面积； c——标准溶液中目标物的浓度，单位为微克每毫升(?g