家蚕和棉铃虫若lethal相关基因的克隆、表达及功能研究.pdf

家蚕和棉铃虫若干lethal相关基因的克隆、表达及功能研究 家蚕和棉铃虫若干lethal相关基因的克隆、表达及功能研究 中文摘要 鳞翅目(Lepidoptera)昆虫是昆虫中的第二大目，与人类生产和生活关系密切，其中许多是 mori)是国际无脊椎动物协会确定的鳞翅目模式昆虫， 极具危害性的农业害虫。家蚕(Bornbyx 也是唯一完成全基因组测序的鳞翅目生物，这为鳞翅目害虫的功能基因研究提供了一个便利的技 术平台。 利用显性致死基因来防治害虫技术(ⅪDL)自2000年被提出以来，受到人们的广泛重视。其 原理是人工饲养携带显性致死基因的雄虫，释放到自然界和野生害虫交配，遗传致死基因给后代， 致其死亡，从而达到控制害虫的目的。该技术具有物种特异性、环保等特点，对农业害虫的防治 具有重大的意义。目前RIDL技术已在果蝇中试验成功，在鳞翅目害虫棉铃虫防治方面也取得了一 些成果。 为了发掘鳞翅目昆虫的lethal相关基因，本研究分别以黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster) (Helicoverpa 下结果： 1．家蚕IethaI(P-因子诱导致死突变)相关基因的克隆及功能研究 果蝇，(3)ne018为NADH脱氢酶基因P转座子诱发的致死突变体，因此编码的蛋白质具有还原型 bp， 1扫573 bp的完整开放读码框(ORF)序列、25bp的5’端非编码区序列(5，UTR)和251bp的3．端非编 码区序列(YUTR)组成，编码蛋白质为190个氨基酸残基，分子量22．7 kD，pI为9．60。Bm．邸)ne018 残基位置具有一个保守的跨膜区域。采用ClustalW进行多序列比对发现，Bm．，(3)ne018与埃及伊 蚊等昆虫NADH脱氢酶具有50％以上的蛋白质同源性，NADH脱氢酶的保守区域高度一致。NJ法 中文摘要 家蚕和棉铃虫若干lethal相关基因的克隆、表达及功能研究 较低外，在幼虫、蛹和蛾期均有较高表达，且存在组织差异性。 命名为Bm一，口，J。分析了基因结构与表达谱。Bm一，例基因的cDNA全长为1630bp，由1200bp的完 整ORF序列、1867UTR和207 bp的5 bp的YUTR组成，编码蛋白质为399个氨基酸残基，分子量 氨基酸残基为E1．dh结构域，该结构域为硫胺素焦磷酸(TPP)依赖性脱氢酶所特有。蛋白质二级 结构预测结果表明a螺旋占28．8％，厮叠占12．O％。采用ClustMW进行多序列比对发现，Bm．z俐 与赤拟谷盗等昆虫PDH具有63％以上的蛋白质同源性，保守区域高度一致。Bm．ZⅢ基因在整个卵 期、幼虫期、蛹期以及5龄幼虫所检测的不同组织都有较高的表达量，且存在较小的组织差异性。 脱氧羟腐胺赖氨酸合酶(DHS)和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶(DOHH)是催化真核翻译起始因 BmDOHH的cDNA全长分别为1311 bp和1874 bp。BmDHS只有一个外显子，没有内含子，包含最 大ORF为1116 bp，编码371个氨基酸，分子量为41．11 个内含子构成，包含最大ORF框为915 bp，编码304个氨基酸，分子量为34．30kD，pI为4．86。BmDHS 编码的蛋白质在47．361氨基酸残基位置为DHS的保守区域：砌D例弛编码的蛋白质分别在23．52， HEAT重复区域。BmDHS 54．83，87．116，177．206，208．237，241．270氨基酸残基位置存在E．z type 和BraD例阳基因所编码的蛋白质与人、果蝇等生物均具有55％以上的蛋白质同源性，保守区域高 度一致。系统发育树分析结果显示DHS和DOHH在分子进化上存在