分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用.pdfVIP

· · 2 ·流感预防与控制· 分子生物学方法在儿童流行性感冒 监测中的应用 朱汝南 钱渊 王芳 刘成贵 【摘要】 目的 建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒（流感）病毒 并进行病毒型和亚型鉴别的方法，同时了解近年来北京地区 型流感病毒血凝素重链（ ）区基因 ! #!$ 的变异特点。方法 根据编码 、型流感病毒膜蛋白 基因的核苷酸序列设计两对引物，用于同一 ! % 逆转录（ ） 反应中（多重 ），根据 、型毒株扩增产物的大小（分别为 和 ）鉴 ’( )*+’ ’()*+’ ! % ,-. /0 1.$ /0 别 、型流感病毒。另根据编码 和 型流感病毒糖蛋白 基因的核苷酸序列设计两对引物， ! % !$ ! #! 与 型 基因引物用于同一 反应中，可区分 、 或 型流感病毒（扩增产物分别为 、 % ’()*+’ !$ ! % 233 /0 和 ）。为提高检测临床标本的敏感性，针对 和 型病毒 基因和 型病毒 基因 $ -41 /0 1.$ /0 !$ ! #! % 又设计了 对引物作为外侧引物，进行巢式)*+’ 反应。根据第二次*+’ 的扩增产物在$51 6 的琼脂 糖凝胶电泳中的大小即可确定型别。经 扩增 年间分离的北京地区 型流感病毒株 *+’ $22. 7 1--1 ! 区基因，测序并进行序列分析。结果 用上述多重 鉴定流感病毒分离株 株，与血凝 #!$ ’()*+’ $,. 抑制试验阳性符合率为 。用多重巢式 检测 份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼 $-- 6 )*+’ 21 吸道标本，与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为 （ 型）、 （ 型）、 （ 4. 52 6 !$ ,4 5 $6 ! 8. 5, 6 % 型）。对 株 年间 型分离株 区基因序列分析结果显示，不同年份的分离株 区