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苜蓿花药愈伤组继代和分化及再生培养条件的优化
摘 要
本实验以苜蓿花药为材料诱导出愈伤组织，进行继代培养和诱导再生植株，旨在研
究这一过程中继代与分化培养条件优化、继代与生根培养基的优化。实验还初步研究了
流式细胞法对苜蓿染色体倍性的鉴定，为完善苜蓿DH系的构建提供科学依据。研究结
果如下：
①花药愈伤继代培养中MS和N6大量元素培养基交替使用，愈伤组织的增值和颜色要
好于单一使用。
mg／1，继代培
②继代培养的第1-5代生长素添加量为2mg／1，增值培养阶段为00．5
养第6—10为1．5-2．5mg／1，添加防褐物质AC0．89／1，为花药愈伤继代培养较优的
生长素组合方式。
③LH用量为0．8一lg／1不仅能增加愈伤组织的生物量，且具有防褐化的作用。
④分化培养中愈伤组织长出松散的绿点时，要及时将细胞分裂素浓度降到2．Omg／1以
下，否则，愈伤较易褐化或形成畸形苗。
⑤激素、大量元素等因素正交实验的结果表明，2，4一D和大量元素对愈伤组织体积增
6一BA、LH和AC在不同的光照下愈伤组织体积增加变化差异明显。
⑥再生植株的生根培养基为1／2MS+O．01—0．05mg／1NAA+Ig／1LH+蔗糖209／1+琼脂
6．59／1较好，基部无愈伤且根粗壮的植株较适合移栽。
⑦流式细胞仪对愈伤组织、再生幼苗的染色体倍性分析结果表明，愈伤组织倍性与继
代培养次数没有明显相关性。
关键词：苜蓿，花药培养，愈伤组织，再生， 流式细胞法
ABSTRACT
The materialsis alfalfa ofculture
anther,inducedcallus，and
experimental studyoptimization
conditionsforsubcultureanddifferentiationand alsostudied
regeneration．Theexperiments preliminary
identificationtheofalfalfachromosomesflow method．It ascientificbasisto
ploidy by cytometry provide
theconstructionofalfalfaDH．Theresultsareasfollows：
improve
alternationofMsandN6wasmoreeffectivemediumthan macroelementin
①．The usingsingle
itisthebetterincrementandcolourofcaUus．
subculture，and
additionamountofauxinis inthe1-5th is
②ne subculture．It 0-0．5
2mg／l generation generallymen
intheincrementculture is1．5-2．5 subcultureinlast．Itisthe combinationof
stage．It mg／l optimum
auxintoaddto for in6—10th subculture．
preventingbrowning generation
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