b-Boule基因5prime;调控序列的克隆与睾丸组织DMR甲基化分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(18):3859-3867 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.18.017 b-Boule 基因5′调控序列的克隆与 睾丸组织DMR 甲基化分析 1 1 1，2 1 3 1 1 1 1 李明桂 , 徐洪涛 , 李隐侠 , 于莎莉 , 赵兴波 , 潘增祥 , 朱 翔 , 谢 庄 , 李齐发 1 2 （南京农业大学动物科技学院，南京 210095 ； 东南大学发育与疾病相关基因教育部重点实验室，南京210009 ； 3 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京 100093） 摘要：【目的】研究b-Boule 基因5′调控序列的序列特征，以及牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织b-Boule 基因DMR 甲基化状态的差异，为揭示b-Boule 基因的表达调控和犏牛雄性不育的表观遗传机制提供依据。【方法】采用PCR 扩增和克隆测序技术获得牦牛b-Boule 基因5′调控序列，利用生物信息学方法分析b-Boule 基因5′调控序列的序 列特征，采用亚硫酸氢钠测序法检测牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织中b-Boule 基因DMR 的甲基化状态。【结果】b-Boule 基因5′调控序列长度为1 352 bp，核心启动子区含有SP1 等甲基化敏感位点，5′端存在一个CpG 岛。犏牛b-Boule 基因DMR 的甲基化水平（17.78%）高于牦牛（7.50%）和黄牛（6.94%）（P＜0.01），特别是CpG 位点33—35 的甲 基化水平差异更明显。【结论】犏牛b-Boule 基因DMR 的甲基化水平高于牦牛和黄牛，结合前期mRNA 表达水平和 组织学观察结果，认为DMR 甲基化在b-Boule 基因的表达调控中发挥关键作用，犏牛b-Boule 基因可能是通过DMR 区的高甲基化抑制其mRNA 表达来阻滞精子发生减数分裂过程。 关键词：牦牛; 犏牛; b-Boule 基因; 5′调控序列; 甲基化 Cloning and Testicular DMR Methylation Analysis of b-Boule Gene 5′-Flanking Regulation Regions 1 1 1,2 1 3 1 LI Ming-gui , XU Hong-tao , LI Yin-xia , YU Sha-li , ZHAO Xing-bo , PAN Zeng-xiang , 1 1 1 ZHU Xiang , XIE Zhuang , LI Qi-fa 1 2 ( College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095 ; Key Laboratory of Developmental