IFNGR在山羊腹腔肠系膜前神经节的表达.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(5):959-965 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.05.14 IFNGR在山羊腹腔肠系膜前神经节的表达 李 强, 王志豪，金秀芳, 徐永平, 郭 晓，董 伟，刘文刚 （西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】为了解山羊腹腔肠系膜前神经节（celiac cranial mesenteric ganglion, CCMG）是否具备 接受 γ-干扰素（interferon-γ, IFN-γ）作用的条件，即是否有IFN-γ受体（interferon-γ receptor, IFNGR）存 在。【方法】取健康雌、雄性成年山羊的CCMG，经40 g·L-1 多聚甲醛磷酸缓冲固定液固定4 h后，用自来水冲洗10 h，经梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后，制作石蜡切片。石蜡切片分 4 套：第 1 套做 H.E.染色；第 2 套 经脱蜡复水，抗原热修复后，再进行免疫组化 SP 法染色；第 3 套经免疫组化 SP 法染色后用苏木精复染；第 4 套 用作阴性对照组。染色后在光学显微镜下观察记录切片，使用 Motic 数码显微镜下拍照后，对图片分析处理，计 算CCMG的IFNGR相对表达量。将相对表达量数据用SPSS18.0软件分析处理，并利用单因子方差分析（One-way ANOVA, LSD）进行显著性检验。取健康雌性、雄性成年山羊的CCMG，经充分研磨后，使用总RNA提取试剂盒提取总RNA， 再以牛的 IFNGR1 cDNA序列为模板设计 IFNGR1 的引物，克隆山羊 IFNGR1 cDNA序列并进行扩增。将扩增产物使用 琼脂糖凝胶电泳检测是否有目的条带，并进行DNA双向测序。将测序结果在NCBI上进行比对和确认，并与其他的 物种的序列进行了同源性比对。【结果】免疫组化染色显示，在 CCMG 内 IFNGR 免疫阳性产物分布广泛，在神经元 胞体、卫星细胞及神经纤维中均有不同程度的着色。其中神经元均为 IFNGR 免疫阳性。几乎所有的神经元胞质为 黄褐色，IFNGR 呈中等阳性，仅有少数神经元胞质染色弱为淡黄色，IFNGR呈弱阳性；在神经元细胞核中，核质部 分明显呈棕褐色，IFNGR为强阳性，而核仁染色相对较弱或无着色，IFNGR为弱阳性或阴性。在非神经元结构中， 卫星细胞染色呈棕褐色或棕色，IFNGR为强阳性或中等阳性。神经纤维和血管内皮细胞为黄褐色或淡黄色，IFNGR 为中等阳性或弱阳性。图像分析表明与其他非神经元结构成分相比，神经元胞体 IFNGR 的相对表达量差异性极显 著（P ＜0.01）。PCR检测结果显示，IFNGR1 PCR产物的泳道在300 bp与400 bp处看到一个清晰的白色条带。测 序结果显示，在山羊CCMG中克隆出了376 bp的 IFNGR1 的部分cDNA序列。通过在NCBI 上与其他物种的基因序列 同源性比对显示，这段序列与绵羊的同源性最高（98%，XM_004011371.1），其次为牛（97%，NM_001035063.1）， 野猪（84%，NM_001177907.1），家兔（73%，XR_085137.1），与褐家鼠（66%，NM_053783.1）的同源性最低。【结 论】在山羊 CCMG 中有 IFNGR 的表达与分布， 并且 IFNGR 主要在交感节后神经元表达与分布。所以 CCMG 具备对 IFN-γ 刺激做出反应的条件，CCMG 的交感节后神经元可能是 IFN-γ 作用的主要靶细胞，提示山羊 CCMG 可能作为 IFN-γ对胃肠道免疫调节途径和自主神经对胃肠道调节的神经途径之间相互协调的关键点。 关键词：γ-干扰素受体；腹腔肠系膜前神经节；免疫组化SP法；PCR；山羊 Expression of IFNGR in the Celiac Superior Mesenteric Ganglion of Goats LI Qiang, WANG Zhi-hao, JIN