草莓AP1同源基因的克隆、表达及启动子分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(10):1972-1981 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.10.010 草莓AP1 同源基因的克隆、表达及启动子分析 邹冬梅，刘月学，张志宏，李 贺，马 跃，代红艳 （沈阳农业大学园艺学院，沈阳110866） 摘要：【目的】从草莓（Fragaria ×ananassa）中克隆APETALA1 (AP1)同源基因，并分析其在不同组织、器官 及不同花发育阶段的表达水平，探讨其在草莓植株成花进程中的作用。【方法】根据其它物种AP1 同源基因的保守 序列设计简并引物，以草莓幼叶和花芽为试材，克隆得到AP1 的基因片段，在此基础上利用RACE 的方法分离获得 其cDNA 全长。利用实时定量RT-PCR 分析草莓不同组织、器官及不同花发育阶段中AP1 同源基因的表达水平。利 用染色体步移的方法分离启动子序列。【结果】从草莓品种‘花姬’中克隆出AP1 同源基因的cDNA 全长序列，命 名为FaAP1；其CDS 长度为735 bp，编码245 个氨基酸，与玫瑰AP1-1 的氨基酸序列同源性最高，达到92%，与 拟南芥AtAP1 的氨基酸序列同源性为64.00%。FaAP1 编码的氨基酸全长序列符合MADS-box 基因家族特征，包含 MADS-box、I-间插域、K-box 域和C-末端几个结构域，是MIKC 类型的MADS-box 基因家族的成员。实时定量RT-PCR 结果表明，在不同组织、不同花器官及不同花发育阶段中 FaAP1 的表达量存在差异。其启动子除了具有 TATA/CAAT-box 外还包含一些特异作用元件。 【结论】从草莓中分离出的FaAP1 基因，在花分生组织形成和花器 官发育中有一定的调控作用。 关键词：草莓；AP1 同源基因；分离；表达；启动子 Cloning, Expression and Promoter Analysis of AP1 Homologous Gene from Strawberry (Fragaria×ananassa) ZOU Dong-mei, LIU Yue-xue, ZHANG Zhi-hong, LI He, MA Yue, DAI Hong-yan (College of Horticulture, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866) Abstract: 【Objective 】The aim of this study was to isolate the AP1 homologous gene from strawberry (Fragaria×ananassa), analyze its expression level in different tissues, organs and at different growth stages of flowers and elucidate the role of it in the floral development progress of strawberry.【Method 】The fragment of an AP1 homologous gene was amplified from young leaves and flower buds of strawberry with the degenerate primers designed according to the conserved sequences of AP1 homologous genes in the other species. The full-length cDNA sequence of this gene was obtained with RACE technique. Real time RT-PCR was used to analyze the expres