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中国农业科学 2015,48(3):613-620
Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.03.20
草莓轻型黄边病毒RT-LAMP检测方法的建立
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陈 柳 ，尚巧霞 ，陈笑瑜 ，邢冬梅 ，冉 策 ，魏艳敏 ，赵晓燕 ，刘正坪
1 2
（北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室，北京 102206 ； 北京市植物保护站，北京 100029 ；
3 北京市昌平区植保植检站，北京102200）
摘要：【目的】草莓轻型黄边病毒（
Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV）是侵染草莓的重要病毒，
严重影响草莓果实的产量和品质。研究旨在建立利用反转录等温扩增技术（reverse transcription loop-mediated
isothermal amplification,RT-LAMP）检测SMYEV的方法。【方法】根据SMYEV外壳蛋白基因3′端保守序列设计 4
个特异性引物 SMYEV-FIP（5′-CAGATCAGCGACAATTTGGACTCCTGAGGAACTTGCTGCT-3′ ）、SMYEV-BIP（5′-GCTTTGTC
GGGGATCCTGGGAAGGCTAAGTCGAAGAGACC-3′）、SMYEV-F （5′-TCAAGTTGGTGACCCTTTCC-3′）和 SMYEV-B （5′-CGAGGAAC
3 3
CAATGTCGTAGC-3′）。对RT-LAMP 检测体系中的条件进行优化，设置反应温度为60、61、62、63、64、65℃，反应
时间为 30、45、60、75 min，分别设置引物SMYEV-FIP/BIP浓度为1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 µmol·L-1 ，引物SMYEV-F3/B3
浓度0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 µmol·L-1 2+ -1
，设置Mg 浓度为2、4、6、8、10 mmol·L ，dNTPs浓度为0、0.4、0.8、
1.2、1.6、2.0 mmol·L-1 -1
，betaine浓度为0、0.4、0.8、1.0、1.2、1.4 mol·L ，DTT浓度为2.0、2.4、2.8、3.2、
3.6、4.0 µmol·L-1 等，并对以上不同反应条件进行检测，确定优化后的 RT-LAMP 检测体系。选用其他常见的草莓
病毒以及健康草莓植株叶片中的RNA作为模板，对RT-LAMP体系的特异性进行测定；将SMYEV的RNA进行10倍梯
度逐级稀释，分别获得RNA 原液、10-1 -2 -3 -4 -5 -6 -7
、10 、10 、10 、10 、10 和10 不同稀释液作为模板，比较RT-LAMP 和
RT-PCR 的检测灵敏度。RT-LAMP 反应产物
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