草酸青霉菌I1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(18):3792-3800 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.18.012 草酸青霉菌I1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选 1,3 2 3 1 唐超西 ，龚明波 ，李顺鹏 ，朱昌雄 1 2 3 （中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所，北京 100081 ； 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，北京 100081 ； 南京农业大学生命 科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室，南京 210095 ） 摘要：【目的】构建草酸青霉菌I1的cDNA 文库，筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉 菌 I1 的初级 cDNA 文库，通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子，测序并进行生物信息学分析。在难溶磷 液体培养基中，进行转化子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸试验。【结果】成功构建了草酸青霉菌I1 的初级cDNA文库，其库容量约为5.29×106 -1 cfu·mL ，重组率为99%；利用难溶磷固体培养基筛选，得到具有溶磷 圈的转化子48个，其中转化子I-4的cDNA序列全长536 bp，为一个新的序列，基因编码氨基酸残基序列长129 n.t。 转化子 E. coli HST08 I-4 在液体难溶磷培养基中培养，提高了有机酸的表达量，并增加了有机酸的种类，在培 养12 h后，开始产生乙酸，24 h后，溶液中产生乳酸、苹果酸和 α-酮戊二酸，培养36 h，溶液pH值由6.32降 到3.69，可溶磷含量达到0.1076 mg·mL-1 。【结论】从草酸青霉I1中筛选到一个溶磷相关基因pstI 。 关键词：草酸青霉菌；cDNA文库；溶磷相关基因；有机酸 Construction of cDNA Library of Penicillium oxalicum I1 and Screening of Phosphate-Dissolving Related Gene 1, 3 2 3 1 TANG Chao-xi , GONG Ming-bo , LI Shun-peng , ZHU Chang-xiong 1 ( Institute of Agricultural Environment and Sustainable Development, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 2 Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 3College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University/Key Laboratory for Microbiological Engineering of Agricultural Envir