茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(10):2983-2991 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.010 茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析 1 1 2 1 3 1 1 余 梅 ，江昌俊 ，房婉萍 ，叶爱华 ，王朝霞 ，李叶云 ，朱 林 1 2 （安徽农业大学茶叶生物化学和生物技术教育部、农业部重点实验室，合肥 230036 ； 南京农业大学园艺学院，南京 210095 ； 3 合肥师范学院生物系，合肥 230061 ） 摘要：【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达，了解茶树花蕾的发育机理，利用分子生 物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表 达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的 14-3-3基因， 通过RT-PCR和 Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1 110个 茶树花蕾 cDNA 片段中，122 个（10.9%）是差异性表达的，其中 87 个在发育晚期特异表达，包括茶树 14-3-3 蛋 白基因（GenBank登录号：DQ444463），其全长为1 072 bp，包含1个由783个核苷酸组成的ORF，编码260个氨 基酸，5′非翻译区和3′非翻译区分别有67 和222个核苷酸，该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序 列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR 和 Western-blot 分析表明该基因在茶树的晚期发育 花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育 时期的基因分离研究。 关键词：茶树；差异表达基因；14-3-3蛋白；cDNA-AFLP；Western-blot Cloning and Analysis of Differential Expression of a 14-3-3 Protein Gene from Tea Flower Bud 1 1 2 1 3 1 1 YU Mei , JIANG Chang-jun , FANG Wan-pin , YE Ai-hua , WANG Zhao-xia , LI Ye-yun , ZHU Lin 1 ( Key Laboratory of Tea Biochemistry Biotechnology, Ministry of Agriculture Ministry of Education, Anhui Agricultural University, Hefei 230036; 2College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095; 3Department of Biology, Hefei Teachers College, Hefei 230061) Abstract: 【Objective 】This study was c