成团泛菌对玉米自交系PS056致病性基因yhfK的克隆.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(2):299-306 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.02.009 成团泛菌对玉米自交系PS056致病性基因 yhfK 的克隆 1 2 1 1 1 2 曹慧英 ，张力群 ，朱振东 ，王晓鸣 ，李洪杰 ，任争光 1 2 （中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程，北京 100081； 中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学 重点开放实验室，北京 100193） 摘要：【目的】通过克隆和鉴定成团泛菌（ Pantoea agglomerans ）的致病相关基因，阐明该种土壤习居细菌 在玉米自交系PS056上引起细菌性干茎腐病的原因。【方法】利用转座子Tn5的随机插入突变特点，构建致病性菌 株 P. agglomerans XJ1突变体库；经对Tn5 插入位点的侧翼扩增，确认突变体PA121 的致病力相关基因；通过基 因互补试验，证明yhfK 与致病力的关系。【结果】通过对突变菌株的接种筛选，获得11个致病力丧失的突变体。 Southern杂交和PCR扩增结果表明，Tn5在突变体PA121 中为单拷贝插入，插入位点为细菌编码内膜蛋白的 yhfK （Tn5 插入在yhfK 的1 082 bp处）。将yhfK 克隆到质粒pBBR1MCS上，并导入突变体PA121中进行互补，生物测 定结果显示转化子完全恢复了正常的细菌生理功能，并能够在玉米自交系PS056上恢复致病力。RT-PCR试验证明， yhfK 调控 hrpA 的转录。【结论】 成团泛菌XJ1中 yhfK 是调控其对植物致病性的基因之一，具有在玉米自交系PS056 上引起细菌性干茎腐病的功能。 关键词：成团泛菌；Tn5转座子；玉米；细菌性干茎腐病；yhfK Cloning of a Pathogenicity Gene yhfK from Pantoea agglomerans on Maize Inbred Line PS056 1 2 1 1 1 2 CAO Hui-ying , ZHANG Li-qun , ZHU Zhen-dong , WANG Xiao-ming , LI Hong-jie , REN Zheng-guang 1 ( Institute of Crop Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences/The National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement, Beijing 100081; 2 The Key Laboratory of Plant Pathology, Ministry of Agriculture, Department of Plant Pathology, China Agricultural University, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】 The purpose of t