大肠杆菌vpr基因突变株的蛋白表达及功能研究.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(1):176-180 Scientia Agricultura Sinica 大肠杆菌 vpr 基因突变株的蛋白表达及功能研究 1 1 2 孙建和 ，严亚贤 ，陆承平 1 2 ( 上海交通大学农业与生物学院，上海 201101 ； 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京 210095) 摘要：【目的】进一步确定vpr 基因及相关蛋白的功能。【方法】在获得vpr 同源基因突变株MC1061△vpr 的 基础上，构建了 vpr 基因突变株的回复株MC1061-C，并进行了噬菌体裂解试验、细胞壁吸附试验、蛋白表达和印 迹试验。【结果】亲本株 MC1061 和回复株 MC1061-C 对 VT2 噬菌体 C43b 的裂解敏感，突变株 MC1061△ vpr 抵抗噬 菌体 C43 d 的裂解。噬菌体吸附细胞壁试验中，吸附 30 min 后，亲本株和回复株的上清液中分别存在 6.4％和 5.2％的游离噬菌体，吸附到90 min时未有大量的游离噬菌体释放。噬菌体与突变株的细胞壁吸附30 min后，上 清液中有85.4％的游离噬菌体存在，表明VT2噬菌体能与亲本MC1061和回复株MC1061-C的细胞壁不可逆吸附， 但不能与突变株MC1061△vpr 的细胞壁发生不可逆吸附。在蛋白表达中，Western blot显示回复株和亲本株均能 转印出特异性90 000蛋白主带，而突变株没有。【结论】 vpr 基因表达的分子量为90 000 的Vpr蛋白与VT2噬菌 体的裂解敏感性有关，可能是VT2噬菌体的裂解受体。 关键词：噬菌体裂解；敏感性；细胞壁吸附；Western blot；受体 Protein Expression and Function of the vpr Gene of the vpr Isogenic Knockout E. coli Mutant 1 1 2 SUN Jian-He , YAN Ya-Xian , LU Cheng-Ping 1 2 （College of Agriculture, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 201101; Key Laboratory of Animal Disease Diagnostic and Immunology, Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University, Nanjiang 210095 ） Abstract: 【Objective 】In order to confirm the function of vpr gene. 【Method 】 The complement of the mutant strain MC1061 △vpr was constructed by translating intact vpr into the vpr isogenic knockout E. coli mutant and i