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中国农业科学 2011,44(6):1292-1300
Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.06.026
大麦EcoTILLING技术体系的优化
1,2 1 1 2 1,2 1 1,2 1,2
夏岩石 ，李荣华 ，郭培国 ，宁正详 ，沈程文 ，田长恩 ，白 盼 ，何其芳
1 2
（广州大学生命科学学院/植物抗逆基因功能研究广州市重点研究室，广州 510006 ； 华南理工大学轻工业与食品学院，广州 510640 ）
摘要：【目的】建立适合于大麦的EcoTILLING技术体系，用于鉴定大麦目的基因或特定区域的自然突变。【方
法】利用 M13 通用接头作荧光标记，采用巢式 PCR 对大麦目的基因进行扩增，从 PCR 扩增的退火温度及模板量、
CEL Ⅰ的用量和酶切处理时间等方面对大麦EcoTILLING技术体系进行了优化。【结果】用于第一次PCR 扩增（10 µL
反应体系）的大麦基因组 DNA 模板最佳用量为 20 ng，第一次 PCR 扩增产物稀释 3 倍后作为第二次 PCR 扩增的模
板，2 次 PCR 扩增的适宜退火温度均为 58℃；在 20 µL -1
CEL Ⅰ酶切体系中，最适酶量为 0.4 µL（3 U·µL ），45℃
条件下最佳酶切处理时间为17.5 min。【结论】优化的EcoTILLING技术体系能有效地发现大麦自然群体中特定区
域的DNA多态性，降低了试验成本，为在大麦及其它作物上的广泛应用提供借鉴。
关键词：大麦；EcoTILLING；优化；点突变
Optimization of EcoTILLING Technique in Barley
1,2 1 1 2 1,2
XIA Yan-shi , LI Rong-hua , GUO Pei-guo , NING Zheng-xiang , SHEN Cheng-wen ,
TIAN Chang-en1, BAI Pan1,2, HE Qi-fang1,2
1
( College of Life Sciences, Guangzhou University/Guangzhou Key Laboratory on Functional Studies for Plant Stress-Resistant
Genes, Guangzhou 510006; 2College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology,
Guangzhou 510640)
Abstract: 【Objective 】The goal of this work is to establish an optimized EcoTILLIN
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