大麦黄矮病毒GAV株系通读蛋白基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

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2016-02-27 发布于安徽
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大麦黄矮病毒GAV株系通读蛋白基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达.pdf

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　2000, 33(4): 38～ 45 Scientia Agricultura Sinica GAV 常胜军,王锡锋,李　莉,马占鸿,周广和 (,,　100094) : 以大麦黄矮病毒( ) 株系的为模板,通过 - 扩增得通读蛋 BYDV GAV NA T PC 白( 　 )基因的目的片段。将其重组到 -7 (+ )并转化 109得 readthrough protein TP pGEM zf JM 到了含有完整 T P基因的重组子。采用双脱氧终止法进行序列分析。结果表明, TP基因为〔1〕 1377nt,与文献报道的血清学较密切的 BYDV M AV-PS1相比,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 87. 4% 和 87. 1%。将此 TP基因克隆到原核表达质粒 pET-5a上,在大肠杆菌 BL21 ( DE3) 中用 IPTG诱导表达,利用分离包含体的方法结合 SDS电泳,得到了纯化的分子量为 66ku的非融合蛋白。 : 大麦黄矮病毒;通读蛋白基因;序列;原核表达 : S435. 123　: A　: 0578-1752( 2000) 04-0038-08 (BYDVs), BYDV , BYDV NA。 BYDV 6 (open reading frame,O F) , O F3。 O F3 O F5, O F5, 〔5～ 7〕。。 BYDV 〔1〕 4 , GPV、GAV、 PAGV MV, GAV MAV , MAV, GAV,。 , GAV BYDV。, BYDV GAV, TP,,, , BYDVs。 1　 1. 1　BYDV GAV BYDV GAV ,( Schiz ap his g raminum ond) , 〔2〕 “”。 BYDV GAV 。 1. 2　 JM 109 BL21(DE3) , pGEM-7zf(+ ) : 1999-08-02 : ( 85-31) : ( 1963-),,,,。。 4 : GAV 39 。 -5 。 pET a Promega 1. 3　、 , T4 DNA, T4 DNA, DNAⅠ Klenow, MM LV-, Taq DNA, Nasin Nase A dNT P, , ,, ,Western blot; BYDV MAV Lister。 1. 4　BYDV GAV RTP PCR 〔4〕 1. 4. 1　　 , . . - 1 , Ueng P P BYDV MAV PS NA BYDV GAV O F5 P1、P2, T P ATG, 5′ Eco Ⅰ N de Ⅰ。 1( 1): ( 4805-4791) P BYDV M AV NA 5′T