大鼠RVLG选择性剪接变异体的鉴定和分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(7): 1474-1480 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.07.021 大鼠RVLG 选择性剪接变异体的鉴定和分析 黄文强, 董珍珍, 邢万金 （内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 010021 ） 摘要：【目的】确认大鼠RVLG （rat vasa-like gene）的第7、8 两个内含子的部分片段在卵巢中可能存在选 择性剪接现象，进一步检测大鼠RVLG 的第7、8 两个内含子在卵巢和睾丸中的选择性剪接形式。【方法】从雌雄各 5 只Wistar 大鼠的卵巢和睾丸组织中提取总RNA，反转录成cDNA 后作为模板，用PCR 扩增RVLG 起始密码后约620 —690 bp 的编码区cDNA。分别选卵巢和睾丸各7 个独立克隆测序，将测序结果与大鼠RVLG 基因组DNA 比对，分 析是否有选择性剪接。【结果】大鼠卵巢和睾丸组织中各7 个RVLG cDNA 编码区5′端620—690 bp 的片段测序结 果均存在45 bp 和15 bp 两处选择性剪接。在7 个卵巢RVLG cDNA 独立克隆中，有5 个仅存45 bp 而缺少15 bp， 两个仅存15 bp 而缺少45 bp；7 个睾丸RVLG cDNA 独立克隆中，4 个仅存在45 bp 而缺少15 bp，两个既含有15 bp 又含有45 bp，一个既没有45 bp 也没有15 bp。经与大鼠RVLG 基因组DNA 序列比对后确认45 bp 位于其第7 内含子5′端的两个GT 之间，15 bp 位于第8 内含子3′端的两个AG 之间，剪掉或保留这两段均符合典型的GT-AG 内含子剪接原则，属选择性剪接。【结论】大鼠RVLG 的第7、8 两个内含子在卵巢和睾丸中均存在多种选择性剪接 形式，体内的标准剪接方式应该是第7 外显子3′端保留45 bp，第9 外显子不保留来自第8 内含子的15 bp。 关键词：RVLG；RT-PCR；选择性剪接 Identification and Characterization of the Alternative Splicing Variants of Rat RVLG HUANG Wen-qiang, DONG Zhen-zhen, XING Wan-jin 1 （Key Laboratory of Mammalian Reproduction Biology and Technology of Ministry of Education/School of Life Sciences, Inner Mongolia University, 010021 ） Abstract ：【Objective 】The objective of the study is to confirm the two fragments of introns 7 and 8 of rat RVLG (rat vasa-like gene) pre-mRNA might be alternatively spliced in the ovary, and to further reveal the potential alternative splicing isoforms of introns 7 and 8 of RVLG pre-mRNA both in ovary and testis. In this study the existence of alternative splicing in RVLG pre-mRNA will be further confirmed and the