高效银耳芽孢遗传转化体系的建立.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(11):3728-3734 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.038 高效银耳芽孢遗传转化体系的建立 1,2 1 1 1,2 郭丽琼 ，刘二鲜 ，王 杰 ，林俊芳 1 2 （华南农业大学食品学院，广州 510640 ； 华南农业大学生物质能研究所，广州 510640 ） 摘要：【目的】建立 PEG 介导的高效银耳（Tremella fuciformis ）芽孢遗传转化体系。【方法】采用 PEG 介 导的原生质体法把表达质粒 pAN7-1（含有构巢曲霉 gpd-An 启动子和潮霉素抗性基因 hph ）和 pLg-hph（含香菇 -1 gpd-Le 启动子和 hph 基因）转化进银耳芽孢的细胞中；采用夹层法在含 50 µg·ml 潮霉素的筛选培养基中初筛银 耳芽孢假定转化子，之后转接于潮霉素含量为100 µg·ml-1 的PDA平板上进行第2次筛选。【结果】PEG4000浓度为 25%时介导的银耳芽孢原生质体初转化率最高；pLg-hph 假定转化子经过 PCR 鉴定及 Southern 杂交验证，结果表 明 hph 基因能有效整合进银耳芽孢的基因组中，其转化率为 110 个/µg DNA。而 pAN7-1 转化子经过 PCR 鉴定及 Southern 杂交验证，结果表明只有部分转化子基因组中整合了 hph 基因，其转化率只有 9 个/µg DNA。银耳芽孢 转化子在PDSA 培养基中继代5次后仍检测到hph 基因的存在，表明外源基因 hph 能在银耳芽孢继代中稳定遗传。 【结论】25%的 PEG4000 能高效介导银耳原生质体的转化；香菇gpd-Le 启动子是银耳芽孢表达外源 hph 基因的强 启动子；外源 hph 基因能够在银耳芽孢继代培养中稳定遗传。 关键词：银耳；PEG介导转化；银耳芽孢；hph 基因 Development of Highly Efficient Genetic Transformation System of Yeast-Like Conidia of Tremella fuciformis 1,2 1 1 1,2 GUO Li-qiong , LIU Er-xian , WANG Jie , LIN Jun-fang 1 2 ( College of Food Sciences, South China Agricultural University, Guangzhou 510640; Institute of Biomass Research, South China Agricultural University, Guangzhou 510640)