柑橘木虱黄龙病菌携带量与其内生菌群相关性.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(11):215 1-2161 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.11.009 柑橘木虱黄龙病菌携带量与其内生菌群相关性 孙丽琴，殷幼平，王 芳，吴晓芳，王中康 （重庆大学生命科学学院，重庆 400030 ） 摘要：【目的】分析柑橘木虱（Diaphorina citri ）体内可能与黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus ） 互作的内生细菌，为黄龙病菌的人工培养及其病害防控奠定基础。【方法】首先通过传统分离培养方法比较不同地 理来源带黄龙病菌（带菌）和不带菌黄龙病菌（不带菌）的木虱中可培养内生细菌的差异。其次将带菌状况不同 的木虱分别分为头、胸、腹3 部分，经PCR 扩增其 16S rDNA 的V6—V8 区，用变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE ）方 法，比较带菌状况不同的木虱内生细菌的差异和木虱不同部位内生细菌的差异。选择 3 种差异的内生细菌： Bacillus sp.、Salmonella sp.、Enterobacter sp.，在8 份带菌状况不同的木虱样品中通过q-PCR 分别对其进 行实时荧光定量分析，再以总细菌量为校正计算包括黄龙病菌在内的 4 种细菌的相对含量，数据经LSD 检验，以 各种细菌相对含量的-lg 值作图，先比较同一样品中 3 种细菌分别与黄龙病菌的相对含量关系，再比较同种细菌 在不同样品中的特性，分析3 种内生细菌和黄龙病菌的互作关系。【结果】不带菌木虱中可培养内生菌菌落丰富度 和菌落形成单位均大于带菌木虱中。在不带菌木虱中共获得14 株形态不同的菌株，分属于芽孢杆菌属（Bacillus， 3 株）、欧文氏菌属（Erwinia，1 株）、克雷伯氏杆菌属（Klebsiella，1 株）、葡萄球菌属（Staphylococcus，2 株）、节杆菌属（Arthrobacter，1 株）、泛菌属（Pantoea，2 株）、果胶杆菌属（Pectobacterium，1 株）、沙门 氏菌属等（Salmonella，1 株）、链霉菌属（Streptomyces，1 株）、Massilia brevitalea （1 株）等10 个细菌属。 在带菌木虱中分得的 4 株细菌在不带菌木虱中均分离到，分属于克雷伯氏菌属、芽孢杆菌属、果胶杆菌属。其中 Dc-11 （嗜气芽孢杆菌属）在带菌木虱和不带菌木虱中分离频率均达到100%，表明其为木虱体内常驻细菌；对木 虱不同部位（头、胸、腹）内生细菌16S rDNA 的PCR-DGGE 图谱显示，带菌与不带菌木虱中细菌种群差别明显， 带菌状况相同的木虱不同部位之间差别不明显。其中优势条带10 （Wolbachia sp. ）、12 （Wolbachia pipientis ）、 13 （Syncytium endosymbiont of Diaphorina citri ）、14 （Uncultured bacterium ）、19 （Serratia marcescens ）、 21 和 22 （均为嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia ）在木虱体内稳定存在，带菌木虱腹部特有优 势内生细菌为Enterobacter sp.，木虱中同样也存在次级内生菌Wolbachia。q-PCR 的结果验证了所选的3 种细 菌在前期传统分离培养和 16S rDNA-PCR-DGGE 中结果的可靠性，同时表明肠杆菌属在8 份样品中与黄龙病菌呈正 相关关系。【结论】黄龙病菌进入木虱体内会改变木虱内生细菌菌群种类和结构；嗜气芽孢杆菌（B. aerophilus ） 在柑橘木虱体内稳定存在，为木虱体内常驻菌群；Enterobacter sp.与黄龙病菌带菌量呈正相关，推测其可能与 黄龙病菌互作。 关键词：柑橘木虱；黄龙病菌；内生细菌；分离培养；PCR-DGGE Correlation of Candidatus Liberibacter asiaticus and the Endophytic