褐飞虱Yellow基因的克隆及功能.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(15):2976-2984 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.15.007 褐飞虱 Yellow 基因的克隆及功能 王 博，姚 云，徐泽炜，林欣大 （中国计量学院生命科学学院，杭州 310018 ） Nilaparvata lugens ）Yellow 基因（NlYellow ），研究该基因在褐飞虱不同发育 摘要：【目的】克隆褐飞虱（ 时期和不同组织中的表达谱，通过 RNA 干扰沉默 NlYellow 了解其功能。【方法】使用网络版 primer3 设计引物克 隆 NlYellow，将得到的cDNA 序列翻译为氨基酸序列后，与GenBank数据库中其他物种的Yellow 序列进行同源比 对，并构建系统发育树。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，研究褐飞虱胚胎、1-5龄若虫以及成虫期 NlYellow 的相对表达量，并检测该基因在雌、雄成虫头、胸、腹、足、翅、卵巢和睾丸等组织中的相对表达量。向褐飞虱 5龄若虫体内注射0.4 µg针对 NlYellow 的双链RNA，待羽化为成虫后观察表型。【结果】克隆得到NlYellow ORF 序列，通过序列比对发现它与豌豆蚜（Acyrthosiphon pisum ）Yellow 的氨基酸序列同源性最高(98%)，但与黑 腹果蝇（Drosophila melanogaster ）、家蚕（Bombyx mori ）等物种的氨基酸序列同源性较低。系统发育树分析 显示它与豌豆蚜的亲缘关系最近。qRT-PCR 显示 NlYellow 在胚胎期表达水平具有波动性，其中第 1、3、4 和 5 天中的表达量低于其他时段的表达量。此外,NlYellow 在 3 龄和 5 龄若虫期表达量高于其他若虫期（P ＜0.05）； 该基因在雄虫头、胸、翅、足、中肠和睾丸中均有表达，但前 4 个组织中表达量相对较高（P ＜0.05）；而在雌 虫中，该基因只在头、胸、翅、足中表达。另外,该基因在短翅成虫中表达水平显著高于长翅成虫（P ＜0.05）， 并且在短翅成虫当中，雄虫中的表达量高于雌虫并达到显著水平（P ＜0.05）。采用 RNA 干扰技术沉默 NlYellow 后，褐飞虱成虫整体体色变黄，胸、腹和足颜色变化尤其明显。【结论】初步推测NlYellow 的功能是参与外表 皮色素沉积，改变体色。 关键词：褐飞虱；黄体基因；基因表达谱；RNA干扰 Molecular Cloning and Function of the Yellow Gene from Nilaparvata lugens WANG Bo, YAO Yun, XU Ze-wei, LIN Xin-da (College of Life Sciences, China Jiliang University, Hangzhou 310018) Abstract: 【Objective 】The objectives of this study are to clone NlYellow from the brown planthopper (Nilaparvata lugens), explore the expression profiles during the development in adults and in different tissues, then study its function through RNA interference. 【Method 】Primers were designed by online version