莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A 和mlc的克隆表达与多克隆抗体制备.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(10):2175-2182 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.10.024 莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A 和mlc 的克隆表达与多克隆抗体制备 王锦明，刘爱红，任巧云，马米玲，刘志杰，李安岩，李有全，赵帅阳， 张浩浩，殷 宏，罗建勋，关贵全 （中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046 ） 摘要：【目的】克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45, GAP45)、 GAP50(gliding associated protein 50，GAP50)、肌球蛋白A （Myosin A, Myo A）和肌球蛋白轻链（myosin light chain, MLC）基因及制备兔源性多克隆抗体。【方法】利用末端快速扩增（rapid-amplification of cDNA ends, RACE） 技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA 中扩增gap45、gap50、myo A 及mlc 基因，将获得的全长或基因的部分序列构建 pGEX-4T-1 原核表达载体，在大肠杆菌BL21 （DE3）pLys 中用IPTG 诱导表达；融合蛋白经纯化后免疫家兔，制备 多克隆抗体，并用ELISA 测定抗体的效价及反应性。【结果】获得了gap45、gap50、myo A 和mlc 基因的全长分别 为664、1391、773 和2 538 bp，开放阅读框长度分别为567、1194、606 和2 514 bp，制备的多克隆抗体具有较 好的特异性，效价高于 1:25 600。【结论】克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myo A 和mlc 基因的全长，并 制备了多克隆抗体，为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础。 关键词：巴贝斯虫；RACE；滑动体；克隆；表达；多克隆抗体 Cloning and Expressing Glideosome Associated Protein Genes of Babesia motasi and Preparation of Their Polyclonal Antibodies WANG Jin-ming, LIU Ai-hong, REN Qiao-yun, MA Mi-ling, LIU Zhi-jie, LI An-yan, LI You-quan, ZHAO Shuai-yang, ZHANG Hao-hao, YIN Hong, LUO Jian-xun, GUAN Gui-quan (State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province/Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science, Lanzhou 730046) Abstract: 【Objective 】To prepare polyclonal antibodies of component genes from glideosome, gap45, gap50, myo A, and mlc were cloned and expressed in prokaryotic system. 【Method 】Rapid amplification of cDNA end (RACE) was used to amplify the full lengths of gap45, gap50, myo A, and mlc. The partial or complete open reading