苜蓿盲蝽化学感受蛋白Alin-CSP6的气味结合特性.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(14):2926-2934 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.14.009 苜蓿盲蝽化学感受蛋白Alin-CSP6 的气味结合特性 1,2 2 2 1 2 2 马 双 ，王松莹 ，谷少华 ，郝再彬 ，张永军 ，郭予元 1 2 ( 东北农业大学生命科学院，哈尔滨 150030； 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193) 摘要：【目的】利用昆虫的嗅觉识别机制，以化学感受蛋白作为潜在的靶标，干扰昆虫的寄主定位及交配等 行为，用于害虫综合治理。【方法】克隆并纯化了1 个新的苜蓿盲蝽化学感受蛋白Alin-CSP6，进行了113 种气味 化合物对Alin-CSP6 的荧光竞争性结合试验，将荧光竞争结合试验筛选出强结合力的气味标样采用“Y”型嗅觉仪 验证行为反应，并采用同源建模的方法构建Alin-CSP6 的3D 结构。【结果】Alin-CSP6 具有较广谱的结合力，能 够与醇、醛、酮、酯、萜、芳香族等多种化合物结合并表现较强的结合能力。其中，β-香茅醇 （β-citronellol）、 反式-2-己烯醛 （trans-2-hexene aldehyde）、6-甲基-5-庚烯-2-酮 （6-methyl-5-heptene-2-ketone）、2-十一烷 酮（2-undecanone）、乙酰丙酸丁酯（butyl levulinate）、月桂烯（myrcene）、左旋- β-蒎烯（(1s)- (-)- β-pinene）、 壬烷 （nonane）、3,4-二甲基苯甲醛 （3,4-dimethyl benzaldehyde）、乙醚 （ethyl ether）、罗勒烯 （ocimene）、 苯乙酮 （acetophenone）、苯甲醛 （benzaldehyde）与Alin-CSP6 有很强的结合力。“Y”型管试验结果发现，反式 -2-己烯醛和苯乙酮对苜蓿盲蝽成虫表现出极显著的引诱作用，而6-甲基-5-庚烯-2-酮、左旋- β-蒎烯和4-乙基 苯甲醛 （4-ethylbenzaldehyde）则对苜蓿盲蝽成虫具有极显著的拒避效果。Alin-CSP6 的3D 结构显示该蛋白主 要由6 个α螺旋构成，分别是13-18(α1)、20-32( α2)、39-52( α3)、59-76( α4)、78-88( α5)和94-102(α6)。 Cys29-Cys36 和Cys55-Cys58 两个二硫键起着稳定蛋白结构的作用。推测Alin-CSP6 的Ile74 和Phe81 基团能够参与 结合油酸酰胺或其类似物。【结论】Alin-CSP6 具有较广泛的气味结合谱，在苜蓿盲蝽嗅觉过程中具有重要作用。 关键词：苜蓿盲蝽；气味化合物；化学感受蛋白Alin-CSP6；荧光竞争结合；Y 型嗅觉仪；三维结构预测 Odorant Binding Characteristics of Chemosensory Protein Alin-CSP6 in Lucerne Plant Bug, Adelphocoris lineolatus (Goeze) 1,2 2 2 1 2 2 MA Shuang , WANG Song-ying , GU Shao-hua , HAO Zai-bin , ZHANG Yong-jun , GUO Yu-yuan 1 2 ( C