农杆菌介导甜高粱转Bt cry1Ah的研究.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(10):1989-1996 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.10.003 农杆菌介导甜高粱转Btcry1Ah 的研究 1 1 2 3 1 3 1 朱 莉 ，郎志宏 ，李桂英 ，何康来 ，岳同卿 ，张 杰 ，黄大昉 1 2 （中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081； 中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/生物质能源 3 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193） 研究中心，北京 100081； 摘要：【目的】建立一套高效、稳定的甜高粱农杆菌遗传转化体系，并在甜高粱中验证来源于苏云金芽胞杆 菌新型杀虫基因cry1Ah表达产物的杀虫活性。【方法】以甜高粱幼穗愈伤组织为转化受体，通过农杆菌介导法将 密码子优化过的Bt cry1Ah导入2 个甜高粱品种“BABUSH”和“MN-3025”中。对获得的再生植株进行PCR检测、 RT-PCR分析及除草剂抗性、目的蛋白表达水平和抗虫性鉴定分析。【结果】对336 块幼穗愈伤组织块进行了农杆 菌侵染，经双丙氨膦（Bialaphos）梯度筛选后共获得66 株再生植株，PCR鉴定在8 个转化事件中有22 株为阳 性植株，平均转化率为 2.38%。RT-PCR检测结果表明，cry1Ah在T 甜高粱转基因植株中能够正常转录。Western 0 blotting分析和ELISA定量测定显示，有5 株可检测到Bt蛋白，但Bt蛋白含量差异较大，最高可达165.69 ng·g-1叶 片鲜重（FW），最低的仅为1.93 ng·g-1 -1 叶片鲜重（FW），平均为87.50 ng·g FW。饲虫试验表明，有2 株转基因 甜高粱植株对亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）表现为抗性。【结论】利用建立的以甜高粱幼穗为外植体的 农杆菌遗传转化体系，可获得具有玉米螟抗性的转基因甜高粱植株，其后代遗传稳定性还有待于进一步的研究。 关键词：甜高粱；cry1Ah；农杆菌转化；抗虫性 Introduction of Bt cry1Ah Gene into Sweet Sorghum (Sorghum bicolor L. Moench) by Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation 1 1 2 3 1 3 1 ZHU Li , LANG Zhi-hong , LI Gui-ying , HE Kang-lai , YUE Tong-qing , ZHANG Jie , HUANG Da-fang 1 2 （Biotechnology Res