木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(19):4050-4056 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.19.017 木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生 1,2 1 1 3 3 1 文 峰 ，肖诗鑫 ，聂扬眉 ，马秋香 ，张 鹏 ，郭文武 1 2 （华中农业大学园艺林学学院/ 园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉 430070 ； 广西壮族自治区亚热带作物研究所，南宁 530001 ； 3 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室，上海 200032 ） 摘要：【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系，为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。 【方法】酶解木薯品种 TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系，分离原生质体的产量最高达 3.5×106 5 5 个/g，FDA 检测其活性约 90%。用 TM2G 培养基以液体浅层法分别在 5×10 个/mL 和 2×10 个/mL 密度下培养，培 养过程中前 30 d 用 0.3 mol·L-1 -1 TM2G 新鲜培养基每 10 d 更换 1 次，此后每 10 d 用 0.25 mol·L TM2G 新鲜培养 基更换。原生质体培养45 d 后即可挑出1—2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、 5 CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×10个/mL的原生质体培养密度下，长出的都是致密型愈伤组织（能分化 胚状体），而在 2×105 个/mL 的密度下培养长出的有致密型愈伤组织，也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。 本试验共挑出1 479个致密细胞团，分化获得757个子叶胚，已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生 质体产量和活性有较大提高，对前人所指出的瓶颈问题有所改进，原生质体再生植株效率有较大提高。 关键词：木薯；脆性胚性愈伤组织（FEC）；原生质体；植株再生 Protoplasts Culture Isolated from Friable Embryogenic Callus of Cassava and Plant Regeneration 1,2 1 1 3 3 1 WEN Feng , XIAO Shi-xin , NIE Yang-mei , MA Qiu-xiang , ZHANG Peng , GUO Wen-wu 1 ( College of Horticulture Forestry Sciences, Huazhong Agricultural