生化分离工程知识点一摘要.docVIP

第一章、绪论 第一节、生物技术与生物分离 一、生物技术 1.上游：菌种、基因工程、分子生物学、遗传学 2.中游：微生物发酵工程、动植物细胞培养、海洋生物培养 3.下游：生物分离工程 第二节、生物物质和生物分离 一、生物物质 1.生物物质：抗生素、有机酸、有机溶剂、氨基酸、多肽、蛋白质（包括酶、抗体）、核苷酸、聚核苷酸、核酸、病毒、糖类、脂类、生物碱、糖苷，天然色素等。 2.抗生素 (1)抗生素多采用有机溶剂萃取法，如青霉素采用乙酸丁酯法。 (2)青霉素、链霉素、四环素、土霉素、金霉素、庆大霉素、新霉素、红霉素、利福霉素 3.有机酸 (1)有机酸采用中和沉淀法（Ca(OH)2形成钙盐沉淀，加浓硫酸析出有机酸溶液，浓缩，结晶。） 低浓度采用离子交换树脂法。 (2)醋酸、乳酸、柠檬酸、葡萄糖酸 4.氨基酸 氨基酸的分离多采用离子交换法 5.多糖 多糖主要采用酒精沉淀法提取，纯化采用层析法。 6.胞外、内酶 酶的分离多采用盐析沉淀法，纯化采用层析法。 7.有机溶剂 有机溶剂主要采用精馏法 8.脂类物质 多用萃取法分离：有机溶剂萃取法和超临界流体萃取法 9.核酸和核苷酸类物质 浓盐法、阴离子去污剂法、苯酚抽提法，水抽提法 二、生物分离过程的一般流程 1.产物提取(isolation)——产物浓缩(concentration)——产物纯化(purification)——成品化(polishing)- 注意：多步分离导致收率降低 第三节、生物分离过程的特点 1、产品稳定性差； 2、质量要求高； 3、成分复杂； 4、浓度低。 第四节、生物分离技术和原理 一、根据分离原理分类 2.蛋白质的分离纯化 第二章 发酵液的预处理和固液分离 第一节、发酵液的预处理 一、发酵液杂质的去除 1.待处理杂质的影响：金属离子、蛋白质，粘稠物 2.无机离子的去除(首先考虑：离子交换法) ⑴Ca2+——草酸、草酸钠，→形成草酸钙沉淀（注意回收草酸） ； ⑵Mg2+——三聚磷酸钠，→形成三聚磷酸钠镁可溶性络合物； ⑶Fe3+——黄血盐，→普鲁士蓝沉淀 ⑷Fe2+——赤血盐，→滕氏蓝沉淀 3.蛋白质的去除 ⑴Savage去除蛋白质（蛋白质处于两相之间） 正丁醇：氯仿=1：4（5）该法条件温和，可避免多糖的降解，但除蛋白质效率低。 ⑵三氯乙酸去除蛋白质 向多糖溶液加入1/5体积10%的三氯乙酸溶液磁力搅拌30 min，离心去除沉淀。缺点是易引起某些多糖的降解。 ⑶蛋白质酶去除蛋白质 在280nm出测定光吸收值 二、改善培养液的性能 1.加热法 除去某些热敏性杂蛋白，降低黏度，有利过滤（如糖液热过滤）。取决于产品的热稳定性、能耗。一般加热65-80℃。 2.调节pH值 3.凝聚 ⑴凝聚：中和电荷，通常细菌的表面都带有负电荷工业上常用阳离子型。 ⑵凝聚分类 ①无机盐类 ：Al2(SO4)3，KAl(SO4)2?18H2O, Fe2(SO4)3，FeSO4，ZnSO4, AlCl3, ZnCl2 ②金属氢氧化物或氧化物 ： Fe(OH)3, Al(OH)3, Ca(OH)2；CaO等高价金属。 4.絮凝 ⑴絮凝剂 ①絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如—COOH）或阳离子（如—NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。 ②它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。 ⑵絮凝剂种类 ①阴离子型：聚丙烯酸钠（无毒，食品医药可用）和聚苯乙烯磺酸 ②阳离子型：聚丙烯酸二烷基胺乙酯和聚二丙基四胺盐 ③非离子型：聚氧化乙烯 ⑶食品和医药工业常用絮凝剂 ①阴离子型：聚丙烯酸钠（无毒，食品医药可用）和聚苯乙烯磺酸； ②无机高分子聚合物絮凝剂：聚合铝盐、聚合铁盐； ③天然有机高分子絮凝剂：丹宁，明胶，壳聚糖。 ⑷ ①聚丙烯酰胺（PAM）是目前工业应用最广泛的高分子絮凝剂之一 ②阴、阳、两性、非离子型：分别用阴、阳、非离子单体和丙烯酰胺共聚而成的线形离分子聚合物。 ③优点：种类多，用量少，ppm级，絮凝体粗大，效果好，速度快。 缺点：聚丙烯酰胺本身无毒，但是其单体有毒。特别是阳离子型，食品医药谨用。 第二节、发酵液的固液分离 一、常用方法 1.工业上常用：过滤、离心 2.其它：重力沉降、浮选、双水相萃取、微孔过滤（固液相分离不完全，浓缩液中70-80%水，常规过滤固相含水30-40%） 二、过滤 1.影响过滤速度的因素：菌种、发酵条件 2.菌种对过滤的影响 ⑴真菌：菌丝粗，易过滤，不需特殊处理，可用真空转筒过滤机。如青霉菌的菌丝直径可达10μm。 ⑵放线菌：菌丝细而分支，交织成网络状，过滤困难，一般须预处理。链霉素菌丝：0.5-1.0μm。（抗生素约70%是放线菌产生）