两个小麦甲基结合蛋白基因cDNA全长克隆及其在种子中的表达特性.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(12):4132-4138 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.12.002 两个小麦甲基结合蛋白基因cDNA全长克隆 及其在种子中的表达特性 1 2 1 2 1 1 2 孟凡荣 ，李永春 ，凌 娜 ，王 潇 ，司志飞 ，张艳霞 ，尹 钧 1 2 （河南农业大学生命科学学院，郑州 450002 ； 河南农业大学国家小麦工程技术研究中心，郑州 450002 ） 摘要： 【目的】分析小麦甲基结合蛋白基因TaMBD1 和 TaMBD6 的序列特征及其在种子形成和萌发过程中的表 达模式，为探讨小麦种子形成及萌发过程中的表观遗传学调控机制积累资料。【方法】利用 RACE 技术进行 cDNA 全长克隆，采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性，并通过半定量RT-PCR分析克隆基因在小麦种子不 同发育阶段及萌发过程中的表达模式。【结果】获得了小麦甲基结合蛋白基因TaMBD1 和 TaMBD6 的cDNA全长，可 分别编码 193 和 187 个氨基酸。氨基酸序列分析发现，TaMBD1 和 TaMBD6 均包含有典型的甲基结合域，TaMBD1 还 包含1个CW型的锌指结构域。三维结构分析显示，TaMBD1和TaMBD6均可形成由β-折叠、α-螺旋及C-端扭曲共 同构成的特定夹层结构。表达特性分析表明：TaMBD1 在种子发育过程中一直保持有较高水平的稳定表达，而在萌 发过程中呈现出有规律的表达动态，即胚中的表达量逐渐增强，胚乳中的表达量却逐渐减弱；TaMBD6 在种子发育 过程中呈现出先升高后降低的表达趋势，以开花后15 d 时表达量最高，但在种子萌发过程中却未检测到其表达。 【结论】首次克隆了小麦甲基结合蛋白基因TaMBD1 和 TaMBD6 的 cDNA 全长，这 2 个基因的编码蛋白均包含有与 DNA 互作的典型功能域；通过对这 2 个基因在种子发育及萌发过程中的表达特性分析表明，TaMBD1 在小麦种子的 发育及萌发过程中均发挥重要调控功能，而TaMBD6仅与种子发育过程中的基因表达调控有关；研究结果为进一步 探讨小麦种子形成和萌发过程的基因表达调控机制提供了重要信息。 关键词：甲基结合蛋白；基因克隆；表达特性；小麦种子 Cloning of Full-Length cDNAs Encoding Two Methyl-Binding Domain Proteins and Their Expression Patterns in Wheat Seeds 1 2 1 2 1 1 2 MENG Fan-rong , LI Yong-chun , LING Na , WANG Xiao , SI Zhi-fei , ZHANG Yan-xia , YIN Jun 1 2 ( College of Life Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002; National Engineering Research Centre for Wheat, Henan Agricultural University,