利用酵母双杂交系统筛选感病番茄中蔬四号与无毒蛋白AvrPto、AvrPtoB互作的蛋白.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(23):4939-4944 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.23.022 利用酵母双杂交系统筛选感病番茄中蔬四号与 无毒蛋白AvrPto、AvrPtoB 互作的蛋白 张月娟，赵廷昌，杨玉文 （中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193） 摘要：【目的】利用酵母双杂交系统在感病番茄中蔬四号中筛选分别与AvrPto、AvrPtoB 互作的蛋白，研究 AvrPto、AvrPtoB 作为毒性因子在感病番茄中的作用通路。【方法】提取感病番茄中蔬四号的总RNA，合成中蔬四 号cDNA 文库，分别构建AvrPto 和AvrPtoB 的诱饵载体，从中蔬四号cDNA 文库中筛选分别与AvrPto、AvrPtoB 互 作的蛋白，并对阳性克隆进行分析和鉴定。【结果】最终筛选到 7 个与AvrPto 互作的蛋白，2 个与AvrPtoB 互 作的蛋白，核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）羧化酶/加氧酶小亚基和AvrPto、AvrPtoB 都能够互作，说明AvrPto、 AvrPtoB 参与破坏植物的光合作用；另外与AvrPto 互作的蛋白质还包括叶绿体原卟啉原氧化酶、叶绿体醛缩酶、 叶绿体延伸因子 TufA、翻译延伸因子等参与植物光合作用蛋白。【结论】分析筛选到的蛋白主要是参与植物光 合作用的蛋白，推测AvrPto、AvrPtoB 通过与植物光合作用有关的蛋白互作，或者影响卡尔文循环，或者影 响叶绿素和相关蛋白质的合成，从而破坏植物光合作用，促进侵袭位点叶肉细胞衰老、死亡，进而引起坏死 症状。 关键词：番茄细菌性斑点病菌；无毒基因；酵母双杂交 Screening of the Interactive Proteins of Avirulent Proteins AvrPto or AvrPtoB in Susceptible Tomato Cultivar Zhongshusihao by Yeast Two-Hybrid System ZHANG Yue-juan, ZHAO Ting -chang, YANG Yu-wen (State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to research the function of AvrPto and AvrPtoB as virulence factor in the susceptible tomato by yeast two-hybrid system. 【Method 】 The total RNA of Zhongshusihao was extracted, and dscDNA was amplified by long distance PCR. pGBKT7-AvrPto and pGBKT7-AvrPtoB were constructed. The AvrPto and AvrPtoB interactive proteins were screened by two-hybrid system. 【Result 】In the susceptible tomato cultivar Zhongshusihao cDNA library, 7 proteins i