利用Cre_lox重组系统建立番茄基因工程雄性不育恢复系.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(10):3581-3591 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.10.025 利用Cre/lox重组系统建立番茄基因工程雄性不育恢复系 1 1 1 1 1 2 宋洪元 ，任雪松 ，司 军 ，李成琼 ，宋 明 ，雷建军 1 2 （西南大学园艺园林学院/重庆市蔬菜学重点实验室，重庆 400715 ； 华南农业大学园艺学院，广州 510642 ） 摘要：【目的】利用 Cre/lox 重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系，特异删除 F中的雄性不育 1 基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase 雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与 NPT Ⅱ基因、Bar 基因融合后获得植物表达载体pBinBarloxTABn，转化番茄获得雄性不育转基因植株。Cre 基因在 CaMV35S启动子 的驱动下转入番茄获得工程恢复系。两者在开花时进行杂交，利用 Cre 重组酶删除F 中的TA29-Barnase 不育基因 1 表达盒使育性恢复。【结果】利用NPT Ⅱ作为转化筛选标记基因获得了番茄雄性不育转基因植株。转基因植株中的 -1 Bar 基因能正常表达，真叶叶盘在含PPT 3 mg·L （phosphinothricin）分化培养基上能分化愈伤组织及芽；真叶 具有抗PPT 20 mg·L-1 浓度以上的能力。获得的 TA29-Barnase 转基因植株表现雄蕊退化、无花粉产生或产生少量形 状畸形且无生活力的花粉。雄性不育植株自花授粉不能坐果，用非转基因保持系花粉授粉后，果实正常膨大结籽， 杂交后代对除草剂Basta的抗性按1 ﹕1分离。不育植株与 Cre 转基因工程恢复系杂交后，果实也正常膨大结籽。 对不育植株与 Cre 转基因工程恢复系杂交后代进行分子检测，结果发现同时含 Bar 基因和 Cre 基因 F 植株中的 1 TA29-Barnase 雄性不育基因被精确删除。TA29-Barnase 基因删除植株育性被恢复，能正常开花结果。【结论】利 用Cre/lox重组系统建立的 Cre 工程恢复系成功将番茄F 代中的不育基因删除，恢复了 F 的育性。该研究结果为 1 1 植物基因工程雄性不育系的育性恢复提供了一条新的途径。 关键词：Cre/lox重组系统；工程不育系；Cre 工程恢复系；番茄 Construction the Engineered Restoring Line of Tomato En