东方山羊豆水通蛋白基因的克隆及初步分析.pdfVIP

吴晓静东方山羊豆水通道蛋白基因的克隆及初步分析 东方山羊豆水通道蛋白基因的克隆及初步分析 研究生：吴晓静 导 师：高洪文研究员 刘大林副教授 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009) 摘 要 东方山羊豆(Galega 春季返青后长势快、产量高、营养物质(特别是粗蛋白)含量高且家畜采食不易 发生鼓胀病并促进奶牛泌乳等优点。东方山羊豆可以鲜草、青贮、干草及脱水粒 sativa)的替代物。因此，是一个值得大面 状物等形式成为紫花苜蓿(Medicago 积推广的牧草品种。但在西北等盐碱地、干旱土地较多的地区，其推广种植受到 了很大的限制，因此研究山羊豆抗旱耐盐基因，为东方山羊豆的抗逆性改良提供 依据和参考。 intrinsic 水通道蛋白AQPs属于古老的通道蛋白MIP(major proteins)成员， 在植物生长发育过程中介导多个生理途径。水通道蛋白能够增加生物膜对水分的 透性，实现水分的长距离运输、快速跨膜转运；通过调节自身的关闭限制植物体 内水分流失，维持水分，有效调节细胞内外的渗透平衡，从而增加植物对水分胁 迫的耐受能力。水通道蛋白还参与其他小分子的共质体和跨细胞途径运输，从而 参与调控植物的一系列重要生理过程，如光合作用、营养物质的吸收以及细胞信 号转导和胁迫应答反应。 本实验根据已知EST片段从东方山羊豆中克隆到一个水通道蛋白(彳QP)基 因，命名为GoAQP，并对其序列进行了生物信息学分析，基因表达特异性分析， 基因表达载体构建及基因的亚细胞定位分析，以期验证GoAQP基因在水分胁迫 下的功能，为东方山羊豆在西北等盐碱地、干旱土地较多的地区的种植推广奠定 基础。 11 扬州大学硕士论文 一 本研究包括以下内容及结论： (1)GoAQP基因的克隆及生物信息学分析 利用东方山羊豆盐胁迫下构建的抑制差减杂交文库中已知的GoAQP基因 8031 85。通过测序和生物信 命名为GoA鲈，并将其登录GenBank，登录号：HM 息学分析表明，此序列全长1258 bp，开放读码框(ORF)870bp，编码289个氨 件对GoAQP进行跨膜结构分析，发现其具有水通道蛋白典型的6个跨膜区。这 通过ProtFun功能预测软件预测，发现其具有运输功能的可能性最高。 (2)GoAQP基因的表达特异性分析 通过Real．Time PCR检测了GoAQP基因在东方山羊豆中的组织表达特异性 和不同逆境处理下的表达特点，结果表明：GoAQP基因在根中表达量最高，茎中 布；外源激素ABA诱导GoAQP基因表达，初期表达上调并成双峰分布，后期随 时间的增加而表达下调。表明GoAQP基因可能参与了东方山羊豆抗旱和耐盐性 的调控，这些调控可能需要ABA信号途径的参与。 (3)GoAQP基因超表达载体的构建及亚细胞定位分析 了基础。同时利用基因枪转化洋葱表皮细胞，借助共聚焦显微镜进行蛋白亚细胞 定位分析。结果表明GoAQP蛋白定位于细胞膜上。 关键词：东方山羊豆；水通道蛋白；表达分析；水分胁迫；表达载体构建；亚 细胞定位 吴晓静东方山羊豆水通道蛋白基因的克隆及初步分析 and ofthe Genefrom Analysis Cloning Aquaporins Gal Orientalis