亮甲酚监染色分后的猪卵母细胞体外发育能力的鉴定.pdfVIP

摘要 摘 要 在猪胚胎生产中，主要从屠宰场采集卵巢．由于挑选的卵母细胞来自不同生长阶段的 卵泡，导致了卵母细胞质量存在差异。本研究通过亮甲酚蓝染色分选后对猪卵母细胞体 外发育能力进行系统性的鉴定与研究，进一步对亮甲酚蓝筛选优质卵母细胞的方法进行 验证，为保证核移植效率提供优质的卵母细胞。 本研究利用13pmol／L亮甲酚蓝(BCB)对GV期猪卵母细胞进行染色，分别检查了 着色组(BCB+)、无着色组(BCB一)和对照组的卵母细胞直径、体外成熟情况、皮质 颗粒迁移程度、成熟后谷胱甘肽GSH水平、乙酰荧光素FDA活力、孤雌胚胎发育能力 与核移植胚胎的发育能力，为体细胞核移植提供优质的卵母细胞。在此基础上，初步研 究了初次卵裂时间与孤雌胚胎发育潜能的关系。BCB染色后，对成熟卵母细胞进行孤 雌激活，在激活后24h挑选出卵裂的胚胎，将其转移到新的培养滴中继续培养，剩余未 卵裂的胚胎在激活后48h重复上述步骤，以0．48h未分时间段的胚胎作为一组，胚胎培 养144 h后，比较不同卵裂时间的胚胎发育能力，预测早期胚胎的发育潜能，为猪克隆 胚胎移植提供优质的胚胎。 研究结果表明： 1)BCB染色后，猪卵母细胞直径测量与体外成熟情况：BCB+组卵母细胞直径大 79．6l％，BCB．组卵母细胞成熟率为53．51％，对照组卵母细胞成熟为63．64％，各组之间 差异显著(PO．05)；染色组成熟率为66．59％，与对照组无显著差异(P0．05)。 2)BCB染色后，猪卵母细胞皮质颗粒迁移程度、GSH水平和FDA活力检测： BCB+组卵母细胞皮质颗粒迁移完全的比例为79．79％，BCB．组为27．06％，对照组的为 0．41 (P0．05)BCB．组和对照组(1 和 pmol／oocyte、5．84pmol／oocyte 活力率为91．43％，BCB．组为54．32％，对照 6．77pmol／oocyte)。BCB+组卵母细胞FDA 组为72．11％，各组之间差异显著(P0．05)。BCB+卵母细胞胞质成熟完全，有利于卵 母细胞的后期发育。 BCB+ 3)BCB染色后，猪卵母细胞的孤雌胚胎发育情况与核移植胚胎发育情况： 4)初次卵裂时间与孤雌胚胎发育潜能的关系：BCB+组0．24h卵裂的孤雌囊胚率为 21．38％)，BCB+组卵母细胞早期卵裂的孤雌胚胎的囊胚率最高。 关键词猪卵母细胞；亮甲酚蓝；体外成熟；发育潜能；初次卵裂时间 ABSTRACT Identificationofthe of Developmental Competence Porcine invitro Oocytes afterthe BCB Sortingby Staining Abstract Invitrothe of are pruduction fromthe porcineembryos，ovariesmaily slaughterplant． Theselected comefromdifferent ofthe