稻瘟病菌温度敏型突变群体的构建.pdf

摘要 稻瘟病是水稻的重要病害，每年都造成产量损失。了解稻瘟病菌的分予遗 传特性不仅对稻瘟病的防治，而且对了解其他植物病原真菌与其寄主的互作也 具有熏要意义。突变体是在基因水平上研究稻瘟病菌分子遗传特性的重要手段。 温度敏感型突变体是研究生物体细胞内大分子互作的有效方法，在基因的复制、 转录、翻译、分子连接、物质运输研究方面很有优越性。建立稻瘟病菌温度敏 感型突变群体，对深入研究稻瘟病菌致病的分子遗传规律具有重要意义。目前 本研究主要有以下进展： 1． 建立了稻瘟病菌温度敏感型突变体的紫外诱变体系。Guy一-I菌株在CM平 板j二12hr循环光照培养7天，用灭菌水洗下分生孢子，均匀涂布于CM平板上。 辐照涂稚有稻瘟病菌 采用功率为15w，波长为254nm的紫外灯，距离为12cm， 分生孢子的CM平板18s，稻瘟病菌存活率在1％左右。利用以上确定的诱变条 件，获得温度敏感型的突变频率在O．07％左右． 2．Guy．11菌株的分生孢子103．104个孢子，皿均匀涂布CM平板，经紫外照射后， 通过滤纸片印记法初筛，再经CM平板复筛，获得了在25C下生长，而34℃不 生长的温度敏感型突变体258个。 在获得的温度敏感型突变体中，有很多菌株在25℃培养条件下，菌落特征 与野生型相比，发生了变化。如：气生菌丝的长短发生变化，造成菌落的厚薄 不同。色素生物合成延迟，边缘新生菌丝与菌落中央老熟菌丝的颜色差异很大， 色素向培养基中的分泌情况发生变化，从培养菌落平板的背面观察，颜色的有 无、深浅变化大。 其中不产孢的温度敏感型突变体有40个： TS-99，TS一102，TS—106，TS—l12； T一42，T一55，T一65，T一73，T-74，T一76，T·84，T-94， 3． 对编号为TS．系列的共68个温度敏感型菌株和编号为T。l～T．130的T．系 列共132个温度敏感型菌株进行了致病性测定。我们首先对编号为TS．系列的68 个突变株进行了致病性测定。先用菌丝块在大麦上接种，进行致病性测定，结果 发现有28个突变子的致病性明显比对照弱，其中有10个突变子不致病。对这 10个突变子单孢分离后，在在大麦上接种，进行致病性测定，结果与用菌丝块接 种的结果相同。而用菌丝块在水稻CO．39上接种，进行致病性测定，结果与在大麦 卜接种的结果不完全一‘致。在水稻上不致病的突变子只有5个，它们是：Ts-29， TS，31—1，TS．72，TS．78，TS一116。 }自于在大麦上的接种结果与在水稻上的不完全一致，因此T．系列的突变体 没有继续在大麦上接种，而是直接在水稻CO一39上离体接种。接种时分生子色』子 的浓度为2×106个／ml，接种时孢子悬浮液中不加吐温一20。结果表明有18株在 活体喷雾接种结果与离体接种的结果相符：离体接种结果表明致病性明显减弱 的温度敏感型突变体，喷雾接种时致病型也大大降低。 4．我们对能够在CM培养基上产孢的Ts一系列突变株进行了附着胞形成特性观 察。在25。C条件下孢子悬浮液培养18h，有2株不形成附着胞，它们是Ts．34 和Ts，58。其余的都能形成附着胞，但致病性减弱的突变株的芽管明显比野生 型氏，而且弯曲，可能形成附着胞的时问延迟。 5．产孢结构的观察：仅对Ts．系列能够产孢的突变株进行了观察。有2株的孢 子形态发生改变(未测量，仅凭显微镜下观察)：TS．29的分生孢子特别小，比 野生型约短一半左右；TS．115的分生孢子比野生型窄，看上去比正常的孢子狭 长。其余的突变体胞正常。 6．我们对T-系列包括致病性发生明显改变的18株在内的30株进行了杂交测 试，测定结果表明影响产孢的温度敏感型突变，往往也影响到其有性态的育性。 分生孢子产生证常的菌株，也能形成与野生型数量相近子囊壳和子囊，而不产 孢的菌株，或气生菌丝很短的菌株，形成的予囊壳少，或不形成子囊壳。而分 生孢子产生少的，子囊壳也少。 温度敏感型突变体在细胞学水平上表现的异常往往与细胞内讵常的信号传 导和物质运输受到干扰有关。稻瘟病菌温度敏感型突变群体的构建为进一步克 隆新的稻瘟病菌致病相关基因打下了初步的基础。同时，也为我们在细胞学水 平上研究稻瘟病菌的生物学性状和在分子水平上研究稻瘟病菌的信号传导途径 和物质运输过程提供了很好的材料。 Abstract rice causes