越橘叶片离体再与badh基因遗传转化的研究.pdfVIP

越橘离体叶片再生和BADH基因转化研究 摘要 越橘(Vaccinium spp．)为多年生落叶或常绿灌木或小灌木。果实中舍有大量对人体 健康有益的物质，越橘果实中的花青甙色素，可促进和活化视网膜的视红素再合成，从而 提高眼睛对暗环境的适应能力．同时，越橘果实还具有防止脑神经衰老．增强心脏功能， 抗氧化、抗溃疡，抗炎及抗癌等独特功效．但越橘为浅根系植物，干旱胁迫对其影响很 大，而利用常规育种方法选育耐旱越橘新品种既费时又费力．由于越橘无性繁殖和遗传 背景复杂的特点，特别适合于进行定向基因转导选育新品种． 本文以高丛越橘‘埃利奥特’，半高丛越橘 ‘北陆’，矮丛越橘‘芬蒂’3个越橘品 种为材料，用叶片作为外植体进行离体再生培养，对越橘叶片再生基因型进行了筛选， 对‘北陆’离体叶片再生体系进行了优化，建立了农杆茵介导的遗传转化体系，经过PCR 初步检测，获得携带BADH基因的抗性植株．研究结果如下： 1．本试验对‘埃利奥特’，‘北陆’，‘芬蒂’3个越橘品种进行叶片不定芽再生的基因型 筛选，发现‘北陆’不但再生频率最高，并且增殖能力强，来源稳定，遗传稳定-J生良好． 为此，试验选定‘北陆’做进一步再生和转化的研究． 2．研究了激素浓度和配比对越橘叶片再生的影响，‘北陆’离体叶片在改良 WPM+I．0mg／LZT培养基中可直接再生出不定芽，再生频率可达96．3％，不定芽生长试 强．CPPU处理的叶片再生频率为95．3％，生长势较弱．BA处理的叶片最低，仅达51％． 也影响越橘叶片再生不定芽，将‘北陆’叶片正放到pH为5．4的改良WPM+ZT1．0mg／L 培养基上。对越橘叶片的再生具有促进作用． 3．越橘对抗生素非常敏感，选择培养中抗生素浓度不宜过高，容易影响不定芽的分化． Cef液体再生培养基和无Cef液体再生培养基各冲洗3次，用滤纸吸干液体，接种到含 有300mg／LCef的筛选培养基中，可抑制农杆菌的生长． 4．在建立‘北陆’叶片不定芽再生体系的基础上，对影响根癌农杆菌遗传转化的各因 素进行了研究．结果表明：侵染前将‘北陆’叶片预培养3天有助于转化，共培养2天 以及在共培养培养基中加入100mg／LAS有利于提高转化率。共培养后延迟5天进行筛 选可以明显提高转化率．用解剖刀在叶片远轴面中脉处横切两刀(尽量不切断的叶片) 的切割方式可以减少对叶片的伤害，进而提高转化率． 5．经过Kan筛选，获得了7株Kan抗性植株，甜菜碱醛脱氢酶基因的两端序列为特异 基因已经成功地整合到越橘基因组中。 关键词：越橘，‘北陆’，再生体系，遗传转化，BADH基因 Il Studieson invitroandBADHGeneTransformationof Regeneration Blueberry Abstract ale shrubs tothe fruitscontain Blueberry Vaccinium，and hiigh fruit-bearingperennialbelonginggenus amountsantioxidants Vitamin of whicharcbeneficialtohealth C，Vitamin including E，VitaminA，SOD, andother inthefhl如areableto anthoeyanias。proteinparticularelements．Anthocyanins improveeyesight, and fruits